| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 缩略词表 | 第7-8页 |
| 目录 | 第8-11页 |
| 一 前言 | 第11-18页 |
| 1 文献综述 | 第11-16页 |
| ·血小板源性生长因子及其受体 | 第11-14页 |
| ·血小板源性生长因子家族 | 第11-12页 |
| ·血小板源性生长因子受体 | 第12-14页 |
| ·PDGF与血管生成 | 第14-15页 |
| ·PDGF/PDGFR信号通路与bFGF | 第15-16页 |
| ·PDGFR转录调控机制研究进展 | 第16页 |
| 2 本论文的研究内容及意义 | 第16-17页 |
| ·研究内容 | 第16页 |
| ·研究意义 | 第16-17页 |
| 3 研究思路 | 第17-18页 |
| 二 实验材料与仪器 | 第18-23页 |
| 1 材料 | 第18-21页 |
| ·细胞株、细菌与质粒 | 第18页 |
| ·主要试剂与试剂盒 | 第18-19页 |
| ·常用试剂及配方 | 第19-21页 |
| ·细胞培养用试剂 | 第19-20页 |
| ·基因重组用试剂 | 第20-21页 |
| ·凝胶迁移率实验用试剂 | 第21页 |
| 2 仪器与设备 | 第21-23页 |
| 三 实验方法 | 第23-38页 |
| 1 生物信息学分析 | 第23页 |
| 2 人PDGFR启动子系列缺失Luciferase报告载体的构建 | 第23-30页 |
| ·实验设计 | 第23-24页 |
| ·人基因组DNA的制备 | 第24-25页 |
| ·PCR扩增 | 第25-27页 |
| ·人PDGFR-a引物序列 | 第25页 |
| ·人PDGFR-p引物序列 | 第25-27页 |
| ·切胶回收纯化PCR或酶切产物 | 第27页 |
| ·PCR产物的酶切 | 第27-28页 |
| ·连接反应 | 第28页 |
| ·大肠杆菌DH5α感受态的制备及CaCl_2转化 | 第28-29页 |
| ·重组子的快速鉴定 | 第29页 |
| ·质粒的抽提 | 第29页 |
| ·酶切鉴定 | 第29-30页 |
| 3 Real-time PCR检测 | 第30-33页 |
| ·引物设计 | 第30页 |
| ·总RNA抽提 | 第30-31页 |
| ·总RNA纯度和完整性检测 | 第31页 |
| ·用DNase I(RNase free)处理RNA | 第31-32页 |
| ·逆转录 | 第32页 |
| ·Real-time PCR | 第32-33页 |
| 4 核心启动子元件的活性检测 | 第33-35页 |
| ·转染用质粒的制备 | 第33-34页 |
| ·质粒转染细胞 | 第34页 |
| ·Lucifersae检测 | 第34-35页 |
| 5 凝胶迁移实验 | 第35-38页 |
| ·探针设计 | 第35页 |
| ·核蛋白的提取 | 第35-36页 |
| ·探针的标记 | 第36页 |
| ·探针标记率的测定 | 第36页 |
| ·反应与电泳 | 第36-38页 |
| 四 结果与分析 | 第38-51页 |
| 1 人PDGFR基因及启动子结构分析 | 第38-40页 |
| ·人PDGFR-a基因及其启动子的生物信息学分析 | 第38-39页 |
| ·人PDGFR-p基因及其启动子的生物信息学分析 | 第39-40页 |
| 2 PDGFR在ECV304/HUVEC细胞中的表达 | 第40-41页 |
| 3 人PDGFR基因上游启动子元件的搜寻 | 第41-44页 |
| ·人PDGFR-a上游启动子元件的搜寻 | 第41-42页 |
| ·人PDGFR-p上游启动子元件的搜寻 | 第42-44页 |
| 4 核因子与PDGFR-β上游启动子元件特异结合 | 第44-47页 |
| ·与PDGFR-p转录相关的转录因子的胞内表达水平检测 | 第44-45页 |
| ·EMSA反应系统检测 | 第45页 |
| ·核因子与B-box~*、C-box~*的体外结合 | 第45-47页 |
| 5 人PDGFR启动子诱导活性分析 | 第47-51页 |
| ·bFGF在ECV304中上调PDGFR | 第47-48页 |
| ·bFGF在HUVEC中下调PDGFR | 第48-49页 |
| ·人PDGFR-α启动子诱导活性分析 | 第49-50页 |
| ·人PDGFR-β启动子诱导活性分析 | 第50-51页 |
| 五 讨论 | 第51-55页 |
| 1 关于人PDGFR基础活性 | 第52-53页 |
| 2 关于人PDGFR诱导活性 | 第53-55页 |
| 参考文献 | 第55-59页 |
| 硕士期间发表论文 | 第59-60页 |
| 致谢 | 第60页 |
