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人血小板源性生长因子受体启动子基础及诱导活性研究

摘要第1-5页
Abstract第5-7页
缩略词表第7-8页
目录第8-11页
一 前言第11-18页
 1 文献综述第11-16页
   ·血小板源性生长因子及其受体第11-14页
     ·血小板源性生长因子家族第11-12页
     ·血小板源性生长因子受体第12-14页
   ·PDGF与血管生成第14-15页
   ·PDGF/PDGFR信号通路与bFGF第15-16页
   ·PDGFR转录调控机制研究进展第16页
 2 本论文的研究内容及意义第16-17页
   ·研究内容第16页
   ·研究意义第16-17页
 3 研究思路第17-18页
二 实验材料与仪器第18-23页
 1 材料第18-21页
   ·细胞株、细菌与质粒第18页
   ·主要试剂与试剂盒第18-19页
   ·常用试剂及配方第19-21页
     ·细胞培养用试剂第19-20页
     ·基因重组用试剂第20-21页
     ·凝胶迁移率实验用试剂第21页
 2 仪器与设备第21-23页
三 实验方法第23-38页
 1 生物信息学分析第23页
 2 人PDGFR启动子系列缺失Luciferase报告载体的构建第23-30页
   ·实验设计第23-24页
   ·人基因组DNA的制备第24-25页
   ·PCR扩增第25-27页
     ·人PDGFR-a引物序列第25页
     ·人PDGFR-p引物序列第25-27页
   ·切胶回收纯化PCR或酶切产物第27页
   ·PCR产物的酶切第27-28页
   ·连接反应第28页
   ·大肠杆菌DH5α感受态的制备及CaCl_2转化第28-29页
   ·重组子的快速鉴定第29页
   ·质粒的抽提第29页
   ·酶切鉴定第29-30页
 3 Real-time PCR检测第30-33页
   ·引物设计第30页
   ·总RNA抽提第30-31页
   ·总RNA纯度和完整性检测第31页
   ·用DNase I(RNase free)处理RNA第31-32页
   ·逆转录第32页
   ·Real-time PCR第32-33页
 4 核心启动子元件的活性检测第33-35页
   ·转染用质粒的制备第33-34页
   ·质粒转染细胞第34页
   ·Lucifersae检测第34-35页
 5 凝胶迁移实验第35-38页
   ·探针设计第35页
   ·核蛋白的提取第35-36页
   ·探针的标记第36页
   ·探针标记率的测定第36页
   ·反应与电泳第36-38页
四 结果与分析第38-51页
 1 人PDGFR基因及启动子结构分析第38-40页
   ·人PDGFR-a基因及其启动子的生物信息学分析第38-39页
   ·人PDGFR-p基因及其启动子的生物信息学分析第39-40页
 2 PDGFR在ECV304/HUVEC细胞中的表达第40-41页
 3 人PDGFR基因上游启动子元件的搜寻第41-44页
   ·人PDGFR-a上游启动子元件的搜寻第41-42页
   ·人PDGFR-p上游启动子元件的搜寻第42-44页
 4 核因子与PDGFR-β上游启动子元件特异结合第44-47页
   ·与PDGFR-p转录相关的转录因子的胞内表达水平检测第44-45页
   ·EMSA反应系统检测第45页
   ·核因子与B-box~*、C-box~*的体外结合第45-47页
 5 人PDGFR启动子诱导活性分析第47-51页
   ·bFGF在ECV304中上调PDGFR第47-48页
   ·bFGF在HUVEC中下调PDGFR第48-49页
   ·人PDGFR-α启动子诱导活性分析第49-50页
   ·人PDGFR-β启动子诱导活性分析第50-51页
五 讨论第51-55页
 1 关于人PDGFR基础活性第52-53页
 2 关于人PDGFR诱导活性第53-55页
参考文献第55-59页
硕士期间发表论文第59-60页
致谢第60页

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