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玉米转录因子ABP5在植物逆境应答中的功能分析

摘要第1-8页
Abstract第8-17页
第一章 引言第17-31页
 1. 文献综述第17-29页
   ·非生物逆境第17-20页
     ·低温逆境第17-18页
     ·盐逆境第18-19页
     ·干旱逆境第19-20页
   ·非生物逆境信号转导的分子机制第20-24页
     ·ABA 依赖性信号途径第21-22页
     ·ABA 非依赖性信号途径第22-23页
     ·逆境信号通路之间的网络联系第23页
     ·小结第23-24页
   ·活性氧(ROS)第24-29页
     ·活性氧在植物体内的双重作用第24-25页
     ·植物体内活性氧的产生部位第25页
     ·植物体内活性氧清除系统第25-27页
     ·活性氧在体内的动态平衡第27-28页
     ·植物中活性氧的检测方法第28-29页
 2. 研究背景,目的和意义第29-30页
 3. 技术路线第30-31页
第二章 ABP5 的转录因子特性分析第31-39页
 1. 材料与方法第31-34页
   ·材料第31页
   ·方法第31-34页
     ·ABP5 ORF/N/M/C 片段的获得第31-32页
     ·pDB-ABP5 系列载体的构建第32页
     ·酵母感受态的制备及转化第32-34页
     ·SC-Leu-Trp-His 平板验证ABP5 与ABRE 元件结合特异性分析第34页
     ·ABP5 转录调控功能分析第34页
 2. 结果与分析第34-38页
   ·ABP5 与拟南芥同源基因序列比对第34-35页
   ·ABP5 与ABRE 元件结合特异性分析第35-36页
   ·pDB-ABP5 系列载体的构建第36-37页
   ·ABP5 在酵母中转录调控功能分析第37-38页
     ·SC-Leu-His 平板验证第37-38页
     ·X-gal 染色验证第38页
 3. 小结第38-39页
第三章 ABP5 在拟南芥中的亚细胞定位第39-46页
 1. 材料与方法第39-42页
   ·材料第39页
   ·方法第39-42页
     ·ABP5-GFP 融合蛋白表达载体的构建第39-40页
     ·农杆菌GV3101 热激感受态细胞的制备和农杆菌转化第40-41页
     ·农杆菌介导的花序浸泡法转化拟南芥Columbia 野生型第41页
     ·转基因植株筛选第41页
     ·激光共聚焦扫描显微镜观察ABP5 蛋白定位第41-42页
 2. 结果与分析第42-45页
   ·pCHF3-ABP5-GFP 融合蛋白表达载体的构建第42-43页
   ·农杆菌转化结果第43-44页
   ·拟南芥转化结果第44页
   ·激光共聚焦扫描显微镜观察ABP5 蛋白定位第44-45页
 3. 小结第45-46页
第四章 ABP5 在玉米中的表达谱分析第46-53页
 1. 材料与方法第46-48页
   ·材料第46页
   ·方法第46-48页
     ·玉米材料的处理第46页
     ·玉米总RNA 的提取第46-47页
     ·RT-PCR 方法第47页
     ·Real Time PCR 方法第47-48页
 2. 结果与分析第48-52页
   ·引物效率验证实验第48-49页
   ·ABP5 在玉米中的表达谱第49-52页
     ·H_2O_2 处理第49-50页
     ·ABA 处理第50页
     ·NaCl 处理第50页
     ·PEG 处理第50-51页
     ·4℃处理第51-52页
 3. 小结第52-53页
第五章 转ABP5 拟南芥纯系植株的获得第53-60页
 1. 材料与方法第53-56页
   ·材料第53页
   ·方法第53-56页
     ·植物稳定表达载体pBI121-ABP5full 及RNAi 载体pK7GWIWG2-ABP50RF/full 的建构第53-54页
     ·农杆菌GV3101 电击感受态细胞的制备和农杆菌转化第54页
     ·拟南芥转化及转基因植株的抗性筛选第54页
     ·转基因植株的PCR 检测第54-55页
     ·转基因纯系植株的获得第55页
     ·转基因拟南芥中ABP5 表达量鉴定第55-56页
 2. 结果与分析第56-59页
   ·植物稳定表达载体的构建第56-58页
     ·pBI121-ABP5full 的构建第56-57页
     ·pK7GWIWG2-ABP50RF,pK7GWIWG2-ABP5full 的构建第57-58页
   ·农杆菌转化结果第58页
   ·拟南芥转化结果第58-59页
   ·最终获得的拟南芥材料(过表达系及RNAi 系)第59页
   ·ABP5 本基因表达第59页
 3. 小结第59-60页
第六章 ABP5 在转基因拟南芥中的生理功能分析第60-71页
 1. 材料与方法第60-61页
   ·材料第60页
   ·方法第60-61页
     ·转基因与野生型植株表型观察第60页
     ·植株对ABA 敏感性分析第60页
     ·NBT 及DAB 染色第60-61页
     ·平板实验第61页
     ·土壤中抗性实验第61页
 2. 结果与分析第61-70页
   ·正常培养条件下,转基因与野生型植株表型观察第61-62页
   ·植株对ABA 敏感性分析第62-64页
   ·NBT 及DAB 染色实验第64-66页
     ·NBT 染色实验第64-65页
     ·DAB 染色实验第65-66页
   ·1μM MV 平板上转基因拟南芥的存活率变化第66页
   ·转ABP5 拟南芥对盐胁迫的耐受性降低第66-68页
     ·200 mM NaCl 平板实验第66-67页
     ·土壤中耐盐实验第67-68页
   ·转ABP5 拟南芥对旱胁迫的耐受性降低第68-69页
   ·转ABP5 拟南芥对寒胁迫的耐受性降低第69-70页
 3. 小结第70-71页
第七章 转ABP5 拟南芥的基因表达分析第71-83页
 1. 材料与方法第71-73页
   ·材料第71页
   ·方法第71-73页
     ·拟南芥材料的培养及处理第71页
     ·用Real Time PCR 方法检测抗逆相关基因的表达量变化第71-72页
     ·ABP5 转基因拟南芥植株的芯片分析第72-73页
 2. 结果与分析第73-82页
   ·拟南芥RNA 的提取第73-74页
   ·抗逆相关基因的表达量变化第74-77页
     ·NaCl 处理与正常培养条件下,在转基因系中比野生型表达量均下降的基因第75页
     ·NaCl 处理与正常培养条件下,在转基因系中比野生型表达量均上升的基因第75-76页
     ·NaCl 处理与正常培养条件下,表达量变化不同的基因第76-77页
   ·基因芯片结果第77-82页
     ·在两个转基因系中表达均发生明显变化的基因第77-78页
     ·ROS 代谢相关基因的表达变化第78-79页
     ·抗病相关基因的表达变化第79-80页
     ·脂类分子运输相关基因的表达变化第80-81页
     ·开花相关基因的表达变化第81-82页
     ·衰老相关基因的表达变化第82页
     ·其它基因的表达变化第82页
 3. 小结第82-83页
第八章 结论与讨论第83-87页
参考文献第87-96页
致谢第96-97页
作者简历第97页

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