| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 缩略语表 | 第12-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-41页 |
| 1 禽传染性支气管炎研究进展 | 第14-35页 |
| ·IBV的病原学 | 第14-17页 |
| ·IBV的分类地位 | 第14-15页 |
| ·IBV的理化特性 | 第15-16页 |
| ·生物学特性 | 第16-17页 |
| ·血凝性 | 第16页 |
| ·对新城疫病毒复制的干扰性 | 第16-17页 |
| ·血清型 | 第17页 |
| ·鸡传染性支气管炎流行病学、临床症状和病理学特征 | 第17-18页 |
| ·流行病学 | 第17页 |
| ·临床病变类型 | 第17-18页 |
| ·呼吸型 | 第17页 |
| ·生殖道型 | 第17-18页 |
| ·肾型 | 第18页 |
| ·肠型 | 第18页 |
| ·腺胃型 | 第18页 |
| ·肌肉型 | 第18页 |
| ·传染性支气管炎的检测方法 | 第18-23页 |
| ·IBV的分离鉴定 | 第18-19页 |
| ·血清学诊断 | 第19-21页 |
| ·沉淀反应 | 第19页 |
| ·血凝(HA)和血凝抑制试验(HI) | 第19-20页 |
| ·酶联免疫吸附试验(ELISA) | 第20页 |
| ·中和试验(VN) | 第20-21页 |
| ·荧光抗体技术(FA) | 第21页 |
| ·斑点免疫金测定法(DIGFA) | 第21页 |
| ·分子生物学检测技术 | 第21-23页 |
| ·逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR) | 第21-22页 |
| ·核酸探针技术 | 第22页 |
| ·限制性片段长度多态性分析(RFLP) | 第22页 |
| ·寡核苷酸指纹图谱分析 | 第22-23页 |
| ·传染性支气管炎疫苗的研究进展 | 第23-27页 |
| ·活疫苗 | 第23-24页 |
| ·灭活疫苗 | 第24页 |
| ·基因工程疫苗 | 第24-27页 |
| ·IB亚单位疫苗 | 第24-25页 |
| ·IB核酸疫苗 | 第25-26页 |
| ·IB重组疫苗 | 第26-27页 |
| ·IB转基因植物疫苗 | 第27页 |
| ·IBV的分子生物学 | 第27-35页 |
| ·IBV的基因组结构 | 第27-28页 |
| ·IBV的转录机制 | 第28页 |
| ·IBV的结构蛋白及其生物学功能 | 第28-33页 |
| ·纤突蛋白的结构与功能 | 第29-31页 |
| ·膜蛋白的结构和功能 | 第31页 |
| ·核蛋白的结构和功能 | 第31-32页 |
| ·E蛋白 | 第32页 |
| ·非结构域 | 第32-33页 |
| ·IBV的复制 | 第33-34页 |
| ·IBV的变异 | 第34-35页 |
| ·IBV遗传变异的研究状况 | 第34页 |
| ·IBV遗传变异的机理 | 第34-35页 |
| 2 粘膜免疫研究进展 | 第35-41页 |
| ·家禽粘膜免疫研究进展 | 第35-38页 |
| ·家禽粘膜系统 | 第35-36页 |
| ·家禽粘膜系统的组成 | 第35页 |
| ·家禽粘膜免疫系统的特点 | 第35-36页 |
| ·家禽粘膜免疫系统的功能 | 第36页 |
| ·家禽粘膜免疫反应 | 第36页 |
| ·家禽粘膜免疫在抗感染中的作用 | 第36-37页 |
| ·家禽粘膜免疫抗感染机制 | 第36页 |
| ·家禽粘膜免疫抗感染作用 | 第36-37页 |
| ·家禽粘膜免疫系统与sIgA | 第37页 |
| ·sIgA是粘膜免疫系统的主要体液防御因子 | 第37页 |
| ·sIgA在粘膜免疫应答中的作用 | 第37页 |
| ·疫苗与粘膜免疫的关系 | 第37页 |
| ·早期粘膜免疫对免疫器官的激活和启动作用 | 第37-38页 |
| ·母源抗体与粘膜免疫 | 第38页 |
| ·经鼻免疫及其佐剂的研究进展 | 第38-41页 |
| ·鼻内免疫 | 第38页 |
| ·鼻粘膜免疫相关佐剂 | 第38-39页 |
| ·霍乱毒素B亚单位研究进展 | 第39-40页 |
| ·CTB粘膜佐剂的展望 | 第40-41页 |
| 第二章 传染性支气管炎病毒核蛋白基因和霍乱毒素B亚基的融合表达 | 第41-57页 |
| 1 研究目的与意义 | 第41页 |
| 2 材料与方法 | 第41-49页 |
| ·试验材料 | 第41-43页 |
| ·质粒及菌株 | 第41页 |
| ·酶及主要试剂 | 第41-43页 |
| ·血清 | 第43页 |
| ·主要溶液的配制 | 第43-44页 |
| ·抗生素类 | 第43页 |
| ·细菌培养基 | 第43页 |
| ·质粒抽提相关溶液 | 第43页 |
| ·SDS-PAGE相关溶液 | 第43-44页 |
| ·Western blot相关溶液 | 第44页 |
| ·表达提取纯化表达蛋白的相关溶液 | 第44页 |
| ·其它试剂 | 第44页 |
| ·方法 | 第44-49页 |
| ·引物设计 | 第44-45页 |
| ·PCR反应体系 | 第45页 |
| ·PCR产物的电泳检测 | 第45页 |
| ·PCR产物的回收与纯化 | 第45页 |
| ·PCR产物的克隆 | 第45-46页 |
| ·大肠杆菌DH5α、BL21感受态的制备(氯化钙法) | 第46页 |
| ·质粒的转化 | 第46页 |
| ·质粒的小量制备(碱裂解法) | 第46页 |
| ·序列测定 | 第46页 |
| ·DNA重组技术(DNA酶切、连接) | 第46-47页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第47页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第47页 |
| ·大肠杆菌BL21(DE3)的诱导表达 | 第47页 |
| ·包涵体的制备 | 第47-48页 |
| ·包涵体的纯化与复性 | 第48页 |
| ·表达蛋白SDS-PAGE分析和Western-blot鉴定 | 第48-49页 |
| ·表达产物的GM_1结合测定(GM_1-ELISA) | 第49页 |
| 3 结果与分析 | 第49-55页 |
| ·ctb、np片段的扩增 | 第49页 |
| ·ctb基因和np基因的克隆与鉴定 | 第49-50页 |
| ·重组表达质粒pKG-ctb和pKG-np的酶切鉴定 | 第50页 |
| ·重组表达质粒pKGCN的酶切鉴定 | 第50-52页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE结果 | 第52-53页 |
| ·重组蛋白rCTB和rNP表达产物的SDS-PAGE结果 | 第52-53页 |
| ·重组蛋白rCTB-NP表达产物的SDS-PAGE结果 | 第53页 |
| ·重组蛋白rNP和rCTB-NP表达产物的Western-blot检测结果 | 第53-55页 |
| ·重组蛋白rCTB和rCTB-NP表达产物的GM_1-ELISA检测 | 第55页 |
| 4 讨论 | 第55-56页 |
| ·表达系统的选择 | 第55-56页 |
| ·融合蛋白的表达及包涵体的提取 | 第56页 |
| ·GM_1-ELISA | 第56页 |
| 5 小结 | 第56-57页 |
| 第三章 传染性支气管炎病毒核蛋白粘膜免疫研究 | 第57-67页 |
| 1 研究目的及意义 | 第57页 |
| 2 材料与方法 | 第57-59页 |
| ·材料 | 第57-58页 |
| ·试验动物 | 第57页 |
| ·主要试剂 | 第57页 |
| ·主要溶液的配制 | 第57-58页 |
| ·方法 | 第58-59页 |
| ·动物的免疫 | 第58页 |
| ·样品的采集与处理 | 第58-59页 |
| ·样本的ELISA检测 | 第59页 |
| ·样本IgG-NP抗体的检测 | 第59页 |
| ·样本IgA-NP抗体的检测 | 第59页 |
| ·数据处理 | 第59页 |
| 3 结果与分析 | 第59-64页 |
| ·免疫前后血清IgG-NP、IgA-NP的ELISA检测结果 | 第59-61页 |
| ·免疫前后鼻腔洗液、气管洗液、肠腔洗液中sIgA-NP的ELISA检测结果 | 第61-64页 |
| 4 讨论 | 第64-66页 |
| ·重组CTB的免疫佐剂活性 | 第64页 |
| ·免疫途径 | 第64-65页 |
| ·不同部位的sIgA含量 | 第65页 |
| ·CTB与外源抗原的使用方式与粘膜免疫效果的关系 | 第65-66页 |
| ·CTB佐剂作用与实验对象的关系 | 第66页 |
| ·IB的防制 | 第66页 |
| 5 小结 | 第66-67页 |
| 第四章 鸡传染性支气管炎ELISA检测方法的初步建立 | 第67-73页 |
| 1 研究目的和意义 | 第67页 |
| 2 材料与方法 | 第67-68页 |
| ·材料 | 第67页 |
| ·病毒及微生物材料 | 第67页 |
| ·主要试剂 | 第67页 |
| ·ELISA试剂的配制 | 第67页 |
| ·主要实验器材 | 第67页 |
| ·方法 | 第67-68页 |
| ·包被抗体(Ab1)和第二抗体(Ab2)最佳工作浓度测定 | 第67-68页 |
| ·敏感性试验及临界点的确定 | 第68页 |
| ·特异性交叉试验 | 第68页 |
| ·特异性阻断叉试验 | 第68页 |
| ·重复性试验 | 第68页 |
| 3 结果与分析 | 第68-71页 |
| ·包被抗体(Ab_1)和兔抗AIV抗体(Ab_2)最佳工作浓度测定结果 | 第68-69页 |
| ·临界值的确定 | 第69页 |
| ·敏感性试验 | 第69-70页 |
| ·交叉性试验 | 第70-71页 |
| ·特异性阻断试验 | 第71页 |
| ·重复性试验结果 | 第71页 |
| 4 讨论 | 第71-72页 |
| ·IBV检测方法的选择 | 第71页 |
| ·影响ELISA特异性的因素 | 第71-72页 |
| ·夹心ELISA的应用前景 | 第72页 |
| 5 小结 | 第72-73页 |
| 参考文献 | 第73-87页 |
| 致谢 | 第87页 |
