| 摘要 | 第1-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 1 前言 | 第12-26页 |
| ·西加毒素的危害及检测进展 | 第12-20页 |
| ·西加毒素成分和性质 | 第12-13页 |
| ·西加毒素的来源 | 第13-14页 |
| ·西加毒素的分布 | 第14-15页 |
| ·西加毒素毒理作用 | 第15-16页 |
| ·西加毒素中毒的临床症状 | 第16页 |
| ·西加毒素的危害 | 第16-17页 |
| ·西加毒素在我国存在现状 | 第17-18页 |
| ·西加毒检测技术现状 | 第18-19页 |
| ·研究目的和意义 | 第19-20页 |
| ·金黄色葡萄球菌乳房炎研究进展 | 第20-26页 |
| ·金黄色葡萄球菌生物学特性 | 第20页 |
| ·金黄色葡萄球菌流行病学 | 第20-21页 |
| ·金黄色葡萄球菌致病性 | 第21页 |
| ·金黄色葡萄球菌乳房炎疫苗研究进展 | 第21-23页 |
| ·金黄色葡萄球菌细胞外结合基质(ECMBPs)的研究进展 | 第23-25页 |
| ·研究目的及意义 | 第25-26页 |
| 2.材料与方法 | 第26-41页 |
| ·试验材料 | 第26-30页 |
| ·标准毒素、质粒与菌株 | 第26页 |
| ·实验动物 | 第26页 |
| ·主要试剂及材料 | 第26-27页 |
| ·主要培养基和试剂的配制 | 第27-28页 |
| ·基因组提取与质粒抽提鉴定试剂的配制 | 第28-29页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)缓冲液的配制 | 第29页 |
| ·克隆表达融合蛋白其它试剂的配制 | 第29-30页 |
| ·寡核苷酸引物 | 第30页 |
| ·Cigua-Check~(?)试剂盒验证的方法 | 第30-31页 |
| ·标准毒素的稀释 | 第30页 |
| ·样品的制备 | 第30页 |
| ·样品检测 | 第30-31页 |
| ·阳性对照 | 第31页 |
| ·阴性对照 | 第31页 |
| ·小鼠生物检测法方法 | 第31-33页 |
| ·小鼠饲养 | 第31页 |
| ·标准毒素的稀释 | 第31-32页 |
| ·毒素LD_(50)值及剂量与中间死亡时间曲线关系的确定 | 第32页 |
| ·加标样品的毒素回收试验 | 第32-33页 |
| ·细胞毒性检测法方法 | 第33-35页 |
| ·细胞及其培养 | 第33页 |
| ·MTT细胞活力分析 | 第33-34页 |
| ·加标样品的毒素回收试验 | 第34-35页 |
| ·金黄色葡萄球菌分离培养和鉴定 | 第35-36页 |
| ·细菌的分离培养 | 第35页 |
| ·接触酶试验 | 第35页 |
| ·生化鉴定试验 | 第35页 |
| ·溶血检测和凝固酶试验 | 第35-36页 |
| ·金黄色葡萄球菌Cna基因的克隆表达方法 | 第36-41页 |
| ·金黄色葡萄球菌基因组DNA的提取 | 第36页 |
| ·Cna序列的PCR扩增 | 第36页 |
| ·PCR产物的回收与纯化 | 第36-37页 |
| ·感受态细胞的制备(氯化钙法) | 第37页 |
| ·质粒的转化 | 第37-38页 |
| ·质粒的小量制备 | 第38页 |
| ·Cna重组克隆质粒的构建及鉴定 | 第38-39页 |
| ·Cna重组表达质粒的构建及鉴定 | 第39页 |
| ·重组质粒的诱导表达 | 第39-40页 |
| ·SDS-PAGE分析 | 第40页 |
| ·表达蛋白的纯化 | 第40-41页 |
| 3 结果与分析 | 第41-53页 |
| ·Cigua-Check~(?)试剂盒验证的结果 | 第41页 |
| ·阳性对照和阴性对照试验结果 | 第41页 |
| ·样品检测结果 | 第41页 |
| ·小鼠生物检测法的结果 | 第41-46页 |
| ·小鼠中毒症状的观察 | 第41-42页 |
| ·毒素LD_(50)值的测定 | 第42-43页 |
| ·毒素剂量—中间死亡时间曲线和毒素剂量单位—中间死亡时间曲线的确定 | 第43-45页 |
| ·加标样品的回收检测 | 第45-46页 |
| ·细胞毒性检测法的结果 | 第46-49页 |
| ·西加毒素与细胞作用不同时间的检测效果 | 第46-48页 |
| ·西加毒素细胞毒性作用的形态学观察结果 | 第48-49页 |
| ·加标样品检测结果 | 第49页 |
| ·金黄色葡萄球菌分离培养和鉴定结果 | 第49-51页 |
| ·细菌分离培养镜检和接触酶试验 | 第49-50页 |
| ·生化鉴定 | 第50页 |
| ·溶血检测和凝固酶试验 | 第50-51页 |
| ·金黄色葡萄球菌Cna基因的克隆表达结果 | 第51-53页 |
| ·金黄色葡萄球菌cna基因的PCR产物 | 第51页 |
| ·重组表达质粒的酶切鉴定 | 第51-52页 |
| ·序列分析 | 第52页 |
| ·表达蛋白的SDS-PAGE | 第52-53页 |
| 4 讨论 | 第53-58页 |
| ·Cigua-Check~(?)试剂盒验证的讨论 | 第53-54页 |
| ·小鼠生物检测法的讨论 | 第54-55页 |
| ·细胞毒性检测法的讨论 | 第55-57页 |
| ·金黄色葡萄球菌Cna基因的克隆与表达的讨论 | 第57-58页 |
| 5 结论 | 第58-60页 |
| ·西加毒素的检测结论 | 第58-59页 |
| ·金黄色葡萄球菌Cna基因的克隆与表达结论 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-67页 |
| 致谢 | 第67-68页 |
| 附录 | 第68页 |
