| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-9页 |
| 引言 | 第9-10页 |
| 1 文献综述 | 第10-21页 |
| ·胰岛素样生长因子及其研究现状 | 第10页 |
| ·胰岛素样生长因子的组成及生理作用 | 第10-14页 |
| ·IGF-1和IGF-2 | 第11页 |
| ·IGF-1和IGF-2/M-6-p(6-磷酸甘露醇)受体 | 第11页 |
| ·胰岛素样生长因子结合蛋白(IGFBPs) | 第11-12页 |
| ·IGF的生物学作用 | 第12-13页 |
| ·口饲IGF-1对动物胃肠道功能的影响 | 第13-14页 |
| ·杆状病毒的研究进展 | 第14-19页 |
| ·杆状病毒的简介 | 第14-15页 |
| ·杆状病毒基因的表达调控 | 第15-16页 |
| ·杆状病毒表达载体研究进展 | 第16页 |
| ·杆状病毒表达系统的建立及其原理 | 第16-17页 |
| ·晚期基因启动子构建转移载体 | 第17-18页 |
| ·早期启动子(IE)的研究进展 | 第18页 |
| ·早期启动子载体的发展 | 第18-19页 |
| ·柞蚕NPV载体表达系统的特点 | 第19页 |
| ·本研究的目的及意义 | 第19-21页 |
| 2 柞蚕核型多角体病毒IE-1基因启动子的克隆与分析 | 第21-32页 |
| ·实验材料和主要仪器 | 第21-22页 |
| ·病毒、细胞、菌种和质粒 | 第21页 |
| ·主要试剂 | 第21页 |
| ·主要仪器 | 第21-22页 |
| ·实验方法 | 第22-25页 |
| ·柞蚕核型多角体病毒DNA的提取 | 第22页 |
| ·引物的设计 | 第22页 |
| ·柞蚕IE-1基因启动子的克隆 | 第22-23页 |
| ·IE-1启动子的测序分析 | 第23页 |
| ·表达载体的构建 | 第23-24页 |
| ·转染用质粒的提取与精制 | 第24-25页 |
| ·转染Hela细胞 | 第25页 |
| ·实验结果与分析 | 第25-31页 |
| ·提取的病毒基因组 | 第25-26页 |
| ·PCR及连接pMD18-T克隆载体结果 | 第26-27页 |
| ·启动子的序列分析 | 第27-28页 |
| ·与其它IE-1基因转录起始区域的序列比对分析 | 第28-29页 |
| ·表达载体的构建 | 第29-30页 |
| ·重组质粒IE-1/pGFP-N2在Hela细胞中的表达 | 第30-31页 |
| ·讨论 | 第31页 |
| ·小结 | 第31-32页 |
| 3 带有IGF-1和GFP的杆状病毒双启动子转移载体的构建 | 第32-48页 |
| ·实验材料和主要仪器 | 第32-33页 |
| ·酶和试剂 | 第32页 |
| ·载体和菌株 | 第32页 |
| ·主要实验器材 | 第32-33页 |
| ·实验方法 | 第33-35页 |
| ·质粒DNA的提取 | 第33页 |
| ·限制性酶切反应 | 第33页 |
| ·从反应液中回收PCR产物 | 第33页 |
| ·从普通琼脂糖凝胶中回收DNA片段 | 第33-34页 |
| ·线性DNA片段末端的去磷酸化 | 第34页 |
| ·DNA的连接 | 第34页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第34页 |
| ·质粒的转化 | 第34页 |
| ·引物设计 | 第34-35页 |
| ·载体的构建策略 | 第35-37页 |
| ·SV40 polyA克隆载体的构建 | 第35页 |
| ·单拷贝IGF-1克隆载体的构建 | 第35-36页 |
| ·用于多拷贝的IGF-1克隆载体构建 | 第36页 |
| ·多拷贝IGF-1基因克隆载体的构建 | 第36页 |
| ·P_(ie)-GFP克隆载体的构建 | 第36-37页 |
| ·双启动子转移载体的构建 | 第37页 |
| ·实验结果与分析 | 第37-46页 |
| ·SV40 polyA克隆载体的构建 | 第37-38页 |
| ·单拷贝IGF-1克隆载体的构建 | 第38-40页 |
| ·用于多拷贝的IGF-1克隆载体构建 | 第40-41页 |
| ·多拷贝IGF-1基因克隆载体的构建 | 第41-42页 |
| ·P_(ie)-GFP克隆载体的构建 | 第42-44页 |
| ·双启动子转移载体的构建 | 第44-46页 |
| ·讨论 | 第46-47页 |
| ·小结 | 第47-48页 |
| 4 结论 | 第48-53页 |
| ·主要结论 | 第48页 |
| ·进一步需要开展的工作 | 第48页 |
| ·创新 | 第48-49页 |
| ·展望 | 第49-53页 |
| 附录 DNA Marker | 第53-54页 |
| 攻读硕士学位期间发表学术论文情况 | 第54-55页 |
| 致谢 | 第55-56页 |
