| 摘要 | 第1-10页 |
| ABSTRACT | 第10-13页 |
| 缩略词表(Abbreviation) | 第13-15页 |
| 第一章 . 柑橘衰退病毒的国内外研究进展 | 第15-34页 |
| ·柑橘衰退病发生概况 | 第15页 |
| ·柑橘衰退病毒的生物学特性 | 第15-17页 |
| ·柑橘衰退病毒的寄主范围 | 第15-16页 |
| ·柑橘衰退病毒的传播途径 | 第16页 |
| ·柑橘衰退病毒的株系分化 | 第16-17页 |
| ·柑橘衰退病毒的分子生物学特性 | 第17-19页 |
| ·柑橘衰退病毒的检测技术 | 第19-22页 |
| ·生物学鉴定 | 第19页 |
| ·血清学鉴定 | 第19-20页 |
| ·分子生物学鉴定 | 第20-22页 |
| ·植物对病毒的抗性 | 第22-24页 |
| ·抗病基因介导的抗性 | 第22-23页 |
| ·RNA沉默介导的病毒抗性 | 第23-24页 |
| ·病毒侵染对寄主基因表达的影响 | 第24-28页 |
| ·筛选寄主差异表达基因的常用方法 | 第24-27页 |
| ·mRNA差异显示PCR技术 | 第24页 |
| ·cDNA代表性差异分析技术 | 第24-25页 |
| ·基因芯片技术 | 第25页 |
| ·抑制性差减杂交技术 | 第25-27页 |
| ·CTV侵染对寄主的影响 | 第27-28页 |
| ·柑橘衰退病的防治 | 第28-32页 |
| ·脱除病毒技术 | 第28页 |
| ·弱毒株系交叉保护 | 第28-31页 |
| ·交叉保护作用的表现 | 第29页 |
| ·交叉保护的作用机理 | 第29-30页 |
| ·交叉保护在柑橘生产上的应用 | 第30-31页 |
| ·抗病毒基因工程 | 第31-32页 |
| ·本课题的研究目的与意义 | 第32-34页 |
| 第二章 CTV弱毒株系诱导墨西哥莱檬差异表达基因的筛选 | 第34-61页 |
| ·前言 | 第34-35页 |
| ·材料与方法 | 第35-45页 |
| ·病毒来源与寄主材料 | 第35页 |
| ·主要仪器及试剂 | 第35页 |
| ·总RNA的提取 | 第35-36页 |
| ·mRNA的纯化 | 第36-37页 |
| ·SSH文库的构建 | 第37-41页 |
| ·第一链cDNA合成 | 第37页 |
| ·第二链cDNA合成 | 第37-38页 |
| ·双链cDNA的RsaⅠ酶切 | 第38页 |
| ·接头连接 | 第38-39页 |
| ·两轮差减杂交 | 第39-40页 |
| ·两次PCR选择性扩增 | 第40-41页 |
| ·文库的生成 | 第41页 |
| ·差减文库的筛选 | 第41-42页 |
| ·插入片段的扩增及反向Northern斑点杂交膜的制备 | 第41页 |
| ·预杂交 | 第41页 |
| ·探针的制备 | 第41-42页 |
| ·反向Northern斑点杂交 | 第42页 |
| ·差异表达片段的选取及测序 | 第42页 |
| ·序列同源性检索 | 第42页 |
| ·差异表达片段的qRT-PCR验证 | 第42-45页 |
| ·总RNA的提取 | 第43页 |
| ·qRT-PCR扩增及数据分析 | 第43-45页 |
| ·结果与分析 | 第45-55页 |
| ·差减文库构建效果 | 第45-49页 |
| ·所提取总RNA的质量 | 第45页 |
| ·分离纯化的mRNA质量分析 | 第45-46页 |
| ·cDNA合成及酶切效果 | 第46-47页 |
| ·接头连接效率检测 | 第47页 |
| ·差减杂交产物的两次选择性PCR扩增结果 | 第47-48页 |
| ·差减文库插入片段的PCR筛选 | 第48-49页 |
| ·差异表达片段的反向Northern斑点杂交筛选 | 第49-50页 |
| ·部分ESTs差异表达量的qRT-PCR分析结果 | 第50-51页 |
| ·差异表达ESTs的序列分析及功能分类 | 第51-53页 |
| ·差异表达ESTs的序列分析 | 第51-52页 |
| ·差异表达基因的功能分类 | 第52-53页 |
| ·CTV不同致病力株系对寄主基因表达影响的比较分析 | 第53-55页 |
| ·讨论 | 第55-59页 |
| ·病毒株系与寄主基因表达 | 第55-56页 |
| ·病害防御与压力应答类基因 | 第56-58页 |
| ·转录相关类基因 | 第58页 |
| ·能量相关类基因 | 第58-59页 |
| ·小结 | 第59-61页 |
| 第三章 CTV不同株系诱导墨西哥莱檬基因表达的时间动态分析 | 第61-71页 |
| ·前言 | 第61页 |
| ·材料与方法 | 第61-64页 |
| ·毒源与寄主材料 | 第61-62页 |
| ·接种方法 | 第62页 |
| ·qRT-PCR引物的设计 | 第62页 |
| ·总RNA的提取 | 第62页 |
| ·qRT-PCR | 第62-64页 |
| ·RT-PCR扩增条件的选择 | 第62-63页 |
| ·qRT-PCR反应体系 | 第63-64页 |
| ·结果与分析 | 第64-68页 |
| ·qRT-PCR扩增条件的优化 | 第64页 |
| ·目标基因qRT-PCR扩增曲线和溶解曲线分析 | 第64-65页 |
| ·CTV不同株系侵染对寄主基因表达的时间动态影响 | 第65-68页 |
| ·几丁质酶的时间表达动态 | 第65-66页 |
| ·咖啡酸-3-甲基转移酶的时间表达动态 | 第66-67页 |
| ·脂质转移蛋白的时间表达动态 | 第67-68页 |
| ·讨论 | 第68-70页 |
| ·小结 | 第70-71页 |
| 第四章 CTV强毒和弱毒株系混合侵染柑橘植株的生物学表现及二者含量的时间动态变化 | 第71-89页 |
| ·前言 | 第71页 |
| ·材料与方法 | 第71-74页 |
| ·试验材料 | 第71-72页 |
| ·接种方法 | 第72页 |
| ·引物设计 | 第72-73页 |
| ·RT-PCR | 第73-74页 |
| ·结果与分析 | 第74-86页 |
| ·CTV不同株系的生物学表现 | 第74-76页 |
| ·CTV弱毒株接种效果 | 第76-77页 |
| ·CTV强毒株在弱毒株接种柑橘植株中的相对含量变化 | 第77-81页 |
| ·HB柚植株中CTV弱毒和强毒株的检测 | 第77-79页 |
| ·甜橙植株中CTV弱毒和强毒株的检测 | 第79-80页 |
| ·莱檬植株中CTV弱毒和强毒株的检测 | 第80-81页 |
| ·柑橘不同品种对CTV强毒和弱毒株含量的影响 | 第81-82页 |
| ·交互接种的寄主植物中CTV弱毒株的巢式RT-PCR检测 | 第82-83页 |
| ·不同接种方式对CTV强毒和弱毒株在寄主中增殖的影响 | 第83-85页 |
| ·CTV强毒和弱毒株在混合接种莱檬植株中的种群结构 | 第85-86页 |
| ·讨论 | 第86-87页 |
| ·小结 | 第87-89页 |
| 第五章 结论与展望 | 第89-92页 |
| ·CTV弱毒株系诱导寄主差异表达基因的蹄选 | 第89页 |
| ·CTV不同株系诱导寄主基因的时间表达动态分析 | 第89-90页 |
| ·CTV不同株系在不同寄主上相对浓度的时序变化分析 | 第90-92页 |
| 参考文献 | 第92-115页 |
| 图版与说明 | 第115-126页 |
| 附录1：差减文库所用接头和引物信息 | 第126-127页 |
| 附录2：正、反向差减文库差异片段与已知基因同源性比对结果 | 第127-137页 |
| 附录3：主要试剂及溶液的配制 | 第137-139页 |
| 附录4：博士在读期间已发表或已接受的文章 | 第139-140页 |
| 致谢 | 第140页 |
