| 摘要 | 第1-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 缩略语表 | 第12-14页 |
| 1 前言 | 第14-35页 |
| ·ZmA的性质 | 第14-18页 |
| ·ZmA的发现 | 第14页 |
| ·ZmA的生物活性 | 第14-17页 |
| ·ZmA的抑菌活性 | 第14-15页 |
| ·ZmA对苏云金芽胞杆菌杀虫晶体蛋白的增效活性 | 第15-16页 |
| ·ZmA的作用机理 | 第16-17页 |
| ·ZmA的产生菌 | 第17-18页 |
| ·抗生素的合成 | 第18-23页 |
| ·抗生素的类别和作用方式 | 第18-19页 |
| ·抗生素的合成途径 | 第19-23页 |
| ·聚酮合成酶途径 | 第19-20页 |
| ·非核糖体肽合成酶途径 | 第20页 |
| ·聚酮合成酶-非核糖体肽合成酶杂合途径 | 第20-23页 |
| ·ZmA生物合成研究基础 | 第23-33页 |
| ·ZmA抗性基因zmaR | 第23-25页 |
| ·zmaR的克隆 | 第23-24页 |
| ·另外一种抗性机制的存在 | 第24-25页 |
| ·ZmA生物合成相关的16kb DNA序列 | 第25-26页 |
| ·ZmA生物合成相关的62.5kb基因簇 | 第26-27页 |
| ·ZmA的生物合成途径 | 第27-33页 |
| ·ZmA生物合成所需的前体物及前体物的合成 | 第27-29页 |
| ·ZmA生物合成基因簇中的PKS模块 | 第29页 |
| ·ZmA生物合成基因簇中的NRPS模块 | 第29-30页 |
| ·ZmA的组装合成和修饰 | 第30-33页 |
| ·本研究的目的与意义 | 第33-35页 |
| ·ZmA产生菌的产量达不到规模化生产的要求 | 第33页 |
| ·ZmA的生物合成基因簇与合成途径未经证实 | 第33页 |
| ·ZmA产生菌对ZmA的自我抗性机制不完善 | 第33页 |
| ·探索克隆、鉴定DNA大片段功能基因簇新的方法 | 第33-35页 |
| 2 材料与方法 | 第35-48页 |
| ·实验材料 | 第35-40页 |
| ·菌株、质粒和引物 | 第35-39页 |
| ·培养基 | 第39页 |
| ·试剂 | 第39-40页 |
| ·仪器 | 第40页 |
| ·实验方法 | 第40-48页 |
| ·DNA常规操作 | 第40-42页 |
| ·质粒的提取与纯化 | 第40-41页 |
| ·DNA体外重组操作 | 第41页 |
| ·大肠杆菌CaCl_2感受态的制备及转化 | 第41页 |
| ·苏云金芽胞杆菌/蜡状芽胞杆菌的电转化 | 第41-42页 |
| ·菌株YBT-1520细菌人工染色体文库的构建 | 第42-44页 |
| ·外源DNA片段的制备 | 第42-43页 |
| ·细菌人工染色体载体的制备 | 第43页 |
| ·大肠杆菌DH10B电转化感受态细胞的制备 | 第43页 |
| ·连接与转化 | 第43-44页 |
| ·文库的筛选与保存 | 第44页 |
| ·荧光定量PCR | 第44页 |
| ·晶体蛋白表达的检测 | 第44-45页 |
| ·SDS-PAGE样品的制备 | 第44页 |
| ·SDS-PAGE检测 | 第44-45页 |
| ·ZmA的纯化与检测 | 第45-46页 |
| ·ZmA的初步纯化 | 第45页 |
| ·ZmA的HPLC检测与HPLC制备柱纯化 | 第45-46页 |
| ·ZmA的抑菌活性和产量检测 | 第46页 |
| ·ZmA的飞行时间质谱检测 | 第46页 |
| ·ZmA敏感性检测 | 第46页 |
| ·乙酰化ZmA分子的胞内质谱检测 | 第46-47页 |
| ·序列分析 | 第47-48页 |
| ·DNA的测序与序列分析 | 第47页 |
| ·蛋白序列的分析 | 第47-48页 |
| 3 结果和分析 | 第48-76页 |
| ·苏云金芽胞杆菌菌株YBT-1520基因组BAC文库的构建 | 第48页 |
| ·覆盖ZmA合成基因簇的重叠联合群的建立 | 第48-50页 |
| ·序列分析揭示潜在的完整的ZmA合成基因簇 | 第50-53页 |
| ·推测可转座的72 Kb区域 | 第50页 |
| ·ORF123推测为潜在的调控蛋白 | 第50-51页 |
| ·zmaWXY推测为ZmA的抗性基因 | 第51-53页 |
| ·大片段功能基因簇异源表达平台的建立 | 第53-64页 |
| ·穿梭载体pEMB0603及pEMB0606的构建 | 第54-56页 |
| ·pEMB0603、pEMB0606及pEMB0557的性质 | 第56-58页 |
| ·pEMB0603,pEMB0606及pEMB0557的转化效率和稳定性 | 第56页 |
| ·pEMB0603,pEMB0606及pEMB0557在BMB171中的拷贝数 | 第56-58页 |
| ·pEMB0603、pEMB0606及pEMB0557的应用 | 第58-63页 |
| ·pEMB0603和pEMB0606对DNA大片段的克隆能力 | 第58-60页 |
| ·pEMB0603和pEMB0606对克隆基因的表达能力 | 第60-62页 |
| ·pEMB0603、pEMB0606和pEMB0557在BMB171中的兼容性 | 第62-63页 |
| ·pEMB0603、pEMB0606及pEMB0557的宿主广泛性 | 第63-64页 |
| ·异源表达确定ZmA合成功能基因簇 | 第64-67页 |
| ·zmaWXY是ZmA的抗性基因 | 第67-70页 |
| ·zmaWXY可以给BMB171带来对ZmA的抗性表型 | 第67-69页 |
| ·zmaWXY可以增加ZmA的产量 | 第69-70页 |
| ·ZmaWXY阻止ZmA进入胞内 | 第70-74页 |
| ·ORF123是ZmA合成潜在的负调控蛋白 | 第74-76页 |
| 4. 讨论 | 第76-81页 |
| ·大片段功能基因簇研究平台的建立 | 第76页 |
| ·完整ZmA合成基因簇的展示和验证 | 第76-77页 |
| ·ZmA产生菌对ZmA完整的抗性免疫模式 | 第77-79页 |
| ·ZmA合成的调控 | 第79页 |
| ·利用组合生物合成对ZmA进行改造 | 第79-81页 |
| 参考文献 | 第81-91页 |
| 致谢 | 第91-92页 |
| 附录A 本研究所用工具载体的物理图谱 | 第92-93页 |
| 附录B 已发表和待发表论文 | 第93页 |
