| 摘要 | 第1-13页 |
| Abstract | 第13-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-32页 |
| 1 葡萄孢及其引起的作物灰霉病 | 第15-19页 |
| ·灰葡萄孢的经济重要性 | 第15-16页 |
| ·葡萄孢属真菌的分类 | 第16页 |
| ·灰葡萄孢菌的生物学特性 | 第16-17页 |
| ·灰霉病的侵染循环 | 第17-18页 |
| ·灰霉病的防治 | 第18-19页 |
| 2 真菌病毒与植物病原真菌 | 第19-32页 |
| ·主要的真菌病毒类群 | 第19-27页 |
| ·单分病毒科(Totiviridae) | 第20-21页 |
| ·双分病毒科(Partitiviridae) | 第21页 |
| ·产黄青霉病毒科(Chrysoviridae) | 第21-22页 |
| ·呼肠孤病毒科(Reoviridae) | 第22页 |
| ·减毒病毒科(Hypoviridae) | 第22-23页 |
| ·裸露RNA病毒科(Narnaviridae) | 第23页 |
| ·Alphaflexiviridae和Gammaflexiviridae | 第23-24页 |
| ·Barnaviridae | 第24-25页 |
| ·Pseudoviridae和Metaviridae | 第25页 |
| ·Megabirnaviridae和Quadriviridae | 第25-26页 |
| ·真菌DNA病毒 | 第26-27页 |
| ·真菌病毒与植物病原真菌的分子互作 | 第27-32页 |
| ·CHV1-EP713的全长基因组序列 | 第27-28页 |
| ·弱毒菌株的培养特性与p29和p40蛋白 | 第28-29页 |
| ·寄主的抗病毒作用与p29和p48蛋白 | 第29-30页 |
| ·寄主感染CHV-EP713后致病力衰退的机制 | 第30-31页 |
| ·结论 | 第31-32页 |
| 第二章 灰葡萄孢菌株CanBc-1的弱毒特性与dsRNA关系研究 | 第32-42页 |
| 1 材料与方法 | 第32-35页 |
| ·供试菌株 | 第32页 |
| ·供试植物 | 第32-33页 |
| ·培养基 | 第33页 |
| ·生长速度、菌核及分生孢子产量的测定 | 第33页 |
| ·致病力测定 | 第33页 |
| ·灰葡萄孢菌株CanBc-1单分生孢子后代的分离 | 第33-34页 |
| ·灰葡萄孢菌株CanBc-1的弱毒特性及dsRNA的水平传染 | 第34页 |
| ·灰葡萄孢菌丝中dsRNA的提取 | 第34-35页 |
| ·数据的统计方法 | 第35页 |
| 2 结果与分析 | 第35-40页 |
| ·灰葡萄孢菌株CanBc-1的弱致病性、培养特性和dsRNA的检测 | 第35-36页 |
| ·菌株CanBc-1单分生孢子后代的致病力、生长速度及dsRNA的检测 | 第36-37页 |
| ·菌株CanBc-1的弱毒特性及dsRNA的传递 | 第37-40页 |
| 3 讨论 | 第40-42页 |
| 第三章 灰葡萄孢菌株CanBc-1c-78中两条dsRNA片段全长cDNA克隆与序列分析 | 第42-59页 |
| 1 材料方法 | 第42-50页 |
| ·灰葡萄孢菌株及培养基 | 第42页 |
| ·细菌菌株及培养基 | 第42页 |
| ·载体和引物 | 第42-43页 |
| ·酶及其它试剂材料 | 第43-44页 |
| ·仪器及设备 | 第44页 |
| ·两条dsRNA片段cDNA序列的克隆 | 第44-47页 |
| ·dsRNA样品的去DNA处理 | 第44页 |
| ·用随机引物合成cDNA | 第44-45页 |
| ·大片段dsRNA中间部分序列的cDNA克隆 | 第45-46页 |
| ·dsRNA末端cDNA序列的获取 | 第46页 |
| ·cDNA的A-Tailing | 第46-47页 |
| ·两条dsRNA片段cDNA序列的拼接及分析 | 第47-49页 |
| ·Northern杂交 | 第49-50页 |
| ·电泳、转膜及固定 | 第49页 |
| ·预杂交 | 第49页 |
| ·探针标记及杂交 | 第49-50页 |
| ·洗膜及压片 | 第50页 |
| 2 结果与分析 | 第50-57页 |
| ·两条dsRNA片段的全长cDNA序列 | 第50-51页 |
| ·全长cDNA序列的验证及分析 | 第51-55页 |
| ·系统发育树的构建 | 第55-57页 |
| 3 讨论 | 第57-59页 |
| 第四章 缺陷型病毒BcMV1-S对BcMV1复制及相关弱毒性状的影响 | 第59-66页 |
| 1 材料方法 | 第59-62页 |
| ·灰葡萄孢菌株及培养基 | 第59页 |
| ·供试植物 | 第59-60页 |
| ·引物 | 第60页 |
| ·酶及其它试剂材料 | 第60页 |
| ·仪器及设备 | 第60页 |
| ·灰葡萄孢菌株生长速度和致病力的测定 | 第60-61页 |
| ·BcMV1-S的水平传染能力的测定 | 第61页 |
| ·荧光实时定量PCR | 第61-62页 |
| ·数据的统计方法 | 第62页 |
| 2 结果与分析 | 第62-64页 |
| ·BcMV1-S的水平传染 | 第62-63页 |
| ·BcMV1-S对BcMV1复制的影响 | 第63-64页 |
| 3 讨论 | 第64-66页 |
| 第五章 BcMV1与灰葡萄孢线粒体的共存及病毒感染后线粒体超微结构的观察 | 第66-73页 |
| 1 材料方法 | 第66-68页 |
| ·灰葡萄孢菌株及培养基 | 第66页 |
| ·试剂材料 | 第66页 |
| ·仪器及设备 | 第66-67页 |
| ·线粒体的分离纯化及dsRNA检测 | 第67页 |
| ·菌丝超薄切片的透射电镜观察(TEM) | 第67-68页 |
| 2 结果与分析 | 第68-71页 |
| ·BcMV1与线粒体的共分离 | 第68-69页 |
| ·线粒体形态的异常 | 第69-71页 |
| 3 讨论 | 第71-73页 |
| 第六章 大蒜盲种葡萄孢菌株GarlicBc-72的弱毒特性与dsRNA关系的研究 | 第73-82页 |
| 1 材料与方法 | 第73-76页 |
| ·供试菌株 | 第73-74页 |
| ·供试植物 | 第74页 |
| ·培养基 | 第74页 |
| ·生长速度及致病力的测定 | 第74-75页 |
| ·大蒜盲种葡萄孢菌株GarlicBc-72单分生孢子后代的分离 | 第75页 |
| ·大蒜盲种葡萄孢菌株GarlicBc-72的弱毒特性相关dsRNA的水平传染 | 第75页 |
| ·葡萄孢菌丝中dsRNA的提取 | 第75页 |
| ·数据的统计方法 | 第75-76页 |
| 2 结果与分析 | 第76-81页 |
| ·菌株GarlicBc-72的弱致病性、培养特性和dsRNA的检测 | 第76-78页 |
| ·菌株GarlicBc-72单分生孢子后代的致病力、生长速度及dsRNA的检测 | 第78-79页 |
| ·菌株GarlicBc-72的弱毒特性相关dsRNA的水平传染 | 第79-81页 |
| 3 讨论 | 第81-82页 |
| 第七章 菌株GarlicBc-72菌丝超微结构观察、病毒粒体提取及原生质体转染 | 第82-93页 |
| 1 材料方法 | 第82-86页 |
| ·大蒜盲种葡萄孢菌株及培养基 | 第82页 |
| ·酶及试剂材料 | 第82页 |
| ·仪器及设备 | 第82-83页 |
| ·病毒粒体的分离 | 第83页 |
| ·菌丝超薄切片和病毒粒体的透射电镜观察 | 第83页 |
| ·病毒粒体的核酸和结构蛋白的检测 | 第83-84页 |
| ·病毒粒体核酸的检测 | 第83-84页 |
| ·SDS-PAGE凝胶的制备及病毒粒体结构蛋白的检测 | 第84页 |
| ·dsRNA病毒核酸体积比的计算 | 第84-85页 |
| ·原生质体的制备 | 第85页 |
| ·菌丝的培养 | 第85页 |
| ·酶液的配制 | 第85页 |
| ·原生质体的制备 | 第85页 |
| ·病毒粒体的转染 | 第85-86页 |
| ·转染菌株的筛选及相关性状的测定 | 第86页 |
| 2 结果与分析 | 第86-91页 |
| ·病毒粒体的负染观察及核酸、结构蛋白的检测 | 第86-87页 |
| ·不同dsRNA病毒粒体核酸的包装密度 | 第87-88页 |
| ·菌丝超薄切片的观察 | 第88-90页 |
| ·转染菌株38T致病力和生长速度衰退 | 第90-91页 |
| 3 讨论 | 第91-93页 |
| 第八章 BpRV1全长cDNA克隆、测序及序列分析 | 第93-113页 |
| 1 材料方法 | 第93-100页 |
| ·灰葡萄孢菌株及培养基 | 第93页 |
| ·细菌菌株及培养基 | 第93页 |
| ·载体和引物 | 第93-94页 |
| ·酶及其它试剂材料 | 第94-95页 |
| ·仪器及设备 | 第95页 |
| ·BpRV1全长cDNA序列的克隆 | 第95-96页 |
| ·dsRNA样品的去DNA处理及用随机引物合成cDNA | 第95页 |
| ·dsRNA-1中间部分序列的cDNA克隆 | 第95页 |
| ·两条dsRNA片段末端cDNA序列的获取 | 第95-96页 |
| ·cDNA的A-Tailing | 第96页 |
| ·dsRNA-1及dsRNA-2 cDNA序列的拼接及分析 | 第96-98页 |
| ·Northern杂交 | 第98-99页 |
| ·电泳、转膜及固定 | 第98页 |
| ·DNA探针的地高辛标记 | 第98页 |
| ·Northern杂交 | 第98-99页 |
| ·杂交膜的显色 | 第99页 |
| ·病毒粒体结构蛋白的指纹图谱分析(PMF) | 第99-100页 |
| 2 结果与分析 | 第100-110页 |
| ·BpRV1的全长cDNA序列 | 第100-103页 |
| ·BpRV1全长cDNA序列的验证及编码蛋白的分析 | 第103-109页 |
| ·系统发育树的构建 | 第109-110页 |
| 3 讨论 | 第110-113页 |
| 第九章 其他葡萄孢菌株中真菌病毒的检测及序列分析 | 第113-131页 |
| 1 材料方法 | 第113-116页 |
| ·葡萄孢菌株及培养基 | 第113页 |
| ·细菌菌株及培养基 | 第113页 |
| ·载体及引物 | 第113-114页 |
| ·酶及其它试剂材料 | 第114页 |
| ·仪器及设备 | 第114页 |
| ·菌株中dsRNA片段cDNA序列的克隆 | 第114页 |
| ·两条dsRNA片段cDNA序列的拼接及分析 | 第114-116页 |
| 2 结果与分析 | 第116-128页 |
| ·葱鳞葡萄孢菌株LeekBc-10中与BpRV1同源性极高的真菌病毒 | 第116-122页 |
| ·葱鳞葡萄孢菌株LeekBc-10的弱毒特性与dsRNA检测 | 第116-118页 |
| ·菌株LeekBc-10中dsRNA全长cDNA序列分析 | 第118-121页 |
| ·菌株LeekBc-10中dsRNA病毒的系统进化树分析 | 第121-122页 |
| ·培养形态异常葡萄孢菌株的dsRNA的检测 | 第122-124页 |
| ·不同葡萄孢菌株中dsRNA的属性 | 第124-128页 |
| 3 讨论 | 第128-131页 |
| 第十章 结论与展望 | 第131-134页 |
| 参考文献 | 第134-152页 |
| 致谢 | 第152-154页 |
| 附录1 常用试剂及培养基配方 | 第154-156页 |
| 附录2 DNA片段的凝胶回收与纯化 | 第156-157页 |
| 附录3 病毒基因组cDNA片段的克隆测序 | 第157-159页 |
| 附录4 灰葡萄孢菌丝总RNA提取 | 第159-160页 |
| 附录5 博士期间已发表的论文 | 第160页 |
