| 第一部分 文献综述 | 第1-33页 |
| 1． 肿瘤的研究进展 | 第10-12页 |
| 1．1 肿瘤的生长过程 | 第10页 |
| 1．2 肿瘤的转移机制 | 第10页 |
| 1．3 肿瘤的生长、转移与血管生成的关系 | 第10-12页 |
| 2． 抗菌肽研究进展 | 第12-24页 |
| 2．1 抗菌肽的发现、结构、分类、性质、作用机制 | 第12-18页 |
| 2．1．1 抗菌肽的发见 | 第12-13页 |
| 2．1．2 抗菌肽的结构特点、分类及理化性质 | 第13-14页 |
| 2．1．3 抗菌肽的作用机理研究进展 | 第14-18页 |
| 2．2 抗菌肽的生物功能及在抗肿瘤细胞方面的作用机理 | 第18-20页 |
| 2．2．1 抗菌肽的生物功能 | 第18-19页 |
| 2．2．2 抗菌肽在抗肿瘤细胞方面的作用机理 | 第19-20页 |
| 2．3 抗菌肽的应用前景 | 第20-22页 |
| 2．3．1 在食品方面的应用 | 第20页 |
| 2．3．2 在医药方面的应用 | 第20-21页 |
| 2．3．3 在农业上的应用 | 第21-22页 |
| 2．4 抗菌肽分子生物学研究进展 | 第22-23页 |
| 2．5 抗菌肽基因工程 | 第23页 |
| 2．6 抗菌肽转基因研究 | 第23-24页 |
| 3． 肿瘤血管生长抑制因子研究进展及肿瘤的抗血管生成疗法 | 第24-31页 |
| 3．1 肿瘤血管生长抑制因子 | 第24-26页 |
| 3．2 肿瘤血管生长抑制因子kringle 5 | 第26-30页 |
| 3．3 肿瘤的抗血管生成疗法 | 第30-31页 |
| 3．4 Kringle5的基因工程药物开发及应用 | 第31页 |
| 4 本研究的意义和内容 | 第31-33页 |
| 第二部分 材料和方法 | 第33-47页 |
| 1． 主要试剂与仪器 | 第33-34页 |
| 1．1 基本试剂及生产厂家 | 第33页 |
| 1．2 酶和其他试剂 | 第33页 |
| 1．3 本试验所用的菌株及质粒 | 第33页 |
| 1．4 主要仪器和厂家 | 第33-34页 |
| 2． 实验方法 | 第34-47页 |
| 2．1 融合蛋白的序列设计 | 第34-35页 |
| 2．2 抗菌肽cecropin B基因的获得 | 第35-37页 |
| 2．3 肿瘤血管生长抑制因子K5的获得 | 第37-38页 |
| 2．4 表达型载体pET32a的制备 | 第38-40页 |
| 2．5 目的基因片段和表达型载体的限制性酶切反应 | 第40-41页 |
| 2．6 酶切产物的纯化 | 第41-42页 |
| 2．7 CB和K5酶切片段与pET32a酶切片段的酶连 | 第42-43页 |
| 2．8 大肠杆菌BL21(DE3)感受态的制备 | 第43页 |
| 2．9 pET32a/CB-K5转化BL21(DE3)感受态细胞 | 第43-44页 |
| 2．10 重组表达载体转化菌落的筛选及测序鉴定 | 第44页 |
| 2．11 重组蛋白的诱导表达及纯化 | 第44-47页 |
| 第三部分 结果与分析 | 第47-52页 |
| 1． CB的合成 | 第47页 |
| 1．1 片段1与片段2PCR结果和片段3与片段4的PCR结果 | 第47页 |
| 1．2 CB全长的PCR结果 | 第47页 |
| 2． k5基因的PCR扩增 | 第47-48页 |
| 3． 重组表达载体的PCR鉴定及测序 | 第48-49页 |
| 3．1 重组表达载体的PCR鉴定 | 第48-49页 |
| 3．2 测序结果 | 第49页 |
| 测序由上海基康公司完成，采用T7teminator作为测序引物。 | 第49页 |
| 4． 融合蛋白的诱导表达 | 第49-50页 |
| 5． 融合蛋白的纯化 | 第50-52页 |
| 5．1 Cu~(2+)螯合的Sepharose Fast Flow层析 | 第50-51页 |
| 5．2 Sephadex G 25柱层析 | 第51页 |
| 5．3 纯化蛋白的SDS-RAGE电泳检测 | 第51-52页 |
| 第四部分 讨论 | 第52-54页 |
| 第五部分 结论 | 第54-55页 |
| 第六部分 参考文献 | 第55-59页 |
| 致谢 | 第59页 |
