| 摘要 | 第1-7页 |
| 第一章 综述 | 第7-34页 |
| 1、甜蛋白的研究进展 | 第8-23页 |
| ·甜蛋白的发现 | 第8-9页 |
| ·甜蛋白的种类及特性 | 第9-12页 |
| ·甜蛋白的结构与功能 | 第12-17页 |
| ·甜蛋白的甜味机理 | 第17页 |
| ·甜蛋白的基因工程 | 第17-21页 |
| ·甜蛋白的用途 | 第21-22页 |
| ·甜蛋白应用现状及前景 | 第22-23页 |
| 2、毕赤酵母表达系统研究进展 | 第23-33页 |
| ·毕赤酵母的生物学特性 | 第24-25页 |
| ·遗传学特性 | 第25-26页 |
| ·表达系统 | 第26-29页 |
| ·外源蛋白在毕赤酵母中的表达 | 第29-31页 |
| ·毕赤酵母表达外源蛋白的影响因素及解决方案 | 第31-32页 |
| ·表达产物及其性状分析 | 第32页 |
| ·应用现状及前景 | 第32-33页 |
| 3、本研究目的及意义 | 第33-34页 |
| 第二章 brazzein 基因在毕赤酵母中的分泌表达 | 第34-64页 |
| 1. 材料与方法 | 第34-47页 |
| ·材料 | 第34-35页 |
| ·菌种和质粒 | 第34页 |
| ·试剂及仪 | 第34页 |
| ·培养基 | 第34-35页 |
| ·方法 | 第35-47页 |
| ·质粒DNA 的小量提取 | 第35-36页 |
| ·质粒DNA 的大量制备 | 第36-37页 |
| ·DNA 的限制性酶切反应 | 第37-38页 |
| ·目的基因的获得 | 第38页 |
| ·目的DNA 片段的电泳回收 | 第38页 |
| ·粘端连接 | 第38-39页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第39页 |
| ·重组质粒DNA 转化大肠杆菌 | 第39-40页 |
| ·转化子的筛选 | 第40页 |
| ·毕赤酵母感受态细胞的制备 | 第40页 |
| ·酵母的电击转化及重组子的初筛 | 第40-41页 |
| ·酵母重组子甲醇利用型的确定 | 第41页 |
| ·酵母重组子的直接PCR 检测 | 第41页 |
| ·Southern Blotting | 第41-43页 |
| ·初筛表达brazzein 的转化子 | 第43页 |
| ·摇床水平各转化子的表达 | 第43-44页 |
| ·Brazzein 的初步纯化 | 第44页 |
| ·蛋白质的SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第44-47页 |
| 2. 结果与分析 | 第47-64页 |
| ·brazzein 基因的设计、合成 | 第47-51页 |
| ·brazzein 基因的设计 | 第47-50页 |
| ·brazzein 基因的合成 | 第50-51页 |
| ·brazzein 基因的克隆及鉴定 | 第51-55页 |
| ·重组分泌表达载体的构建与鉴定 | 第55-57页 |
| ·重组分泌表达载体转化毕赤酵母及重组酵母的筛选 | 第57-58页 |
| ·酵母重组子的PCR 检测 | 第58-59页 |
| ·酵母重组子的Southern 杂交分析 | 第59页 |
| ·可分泌表达Brazzein 的酵母重组子的初筛 | 第59-61页 |
| ·摇瓶水平Brazzein 在重组毕赤酵母中的分泌表达 | 第61-63页 |
| ·重组酵母分泌表达产物的活性检测 | 第63-64页 |
| 第三章 讨论 | 第64-66页 |
| 结论 | 第66-67页 |
| 本研究创新点 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-75页 |
| 英文摘要 | 第75页 |