| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 英文缩写词表 | 第9-10页 |
| 前言 | 第10-17页 |
| 1 Ghrelin的发现 | 第10-11页 |
| 2 Ghrelin的分布、结构及功能 | 第11-12页 |
| ·Ghrelin的合成与分布 | 第11-12页 |
| ·结构与功能 | 第12页 |
| 3.Ghrelin受体分布 | 第12页 |
| 4.Ghrelin的生物学作用 | 第12-16页 |
| ·特异性刺激垂体前叶生长激素的释放 | 第13-14页 |
| ·增加食欲、调节能量代谢 | 第14-15页 |
| ·GhreIin对胃肠道功能的影响 | 第15页 |
| ·Ghrelin对心脏功能的影响 | 第15-16页 |
| ·增强机体免疫力与抗应激能力 | 第16页 |
| ·其他作用 | 第16页 |
| 试验目的和意义 | 第16-17页 |
| 试验一 猪Ghrelin基因的克隆和原核表达 | 第17-30页 |
| 材料 | 第17-19页 |
| 1 试验材料 | 第17页 |
| 2.酶与试剂 | 第17页 |
| 3.溶液及培养基配制 | 第17-18页 |
| 4.主要仪器 | 第18-19页 |
| 方法 | 第19-24页 |
| 1.引物设计与合成 | 第19页 |
| 2.GhreIin cDNA的克隆 | 第19-21页 |
| ·胃组织总RNA的提取 | 第19页 |
| ·RNA琼脂糖凝胶电泳 | 第19-20页 |
| ·RT-PCR反应 | 第20页 |
| ·PCR反应 | 第20页 |
| ·DNA琼脂糖凝胶电泳 | 第20页 |
| ·DNA片段的回收 | 第20-21页 |
| 3.DNA片段的连接 | 第21-22页 |
| ·连接酶连接DNA片段 | 第21页 |
| ·载体DNA的酶切反应 | 第21页 |
| ·目的基因与质粒载体的连接反应 | 第21-22页 |
| ·感受态的制备 | 第22页 |
| 4.质粒的转化 | 第22-23页 |
| ·质粒的小量提取 | 第22页 |
| ·克隆载体的鉴定 | 第22-23页 |
| ·序列测定 | 第23页 |
| 5.pGhrelin原核表达质粒的构建 | 第23-24页 |
| ·pGhrelin在大肠杆菌BL_(21)中的表达 | 第23页 |
| ·表达产物的聚丙烯酰胺凝胶电泳检测 | 第23-24页 |
| ·SDS聚丙烯酰胺凝胶的配制 | 第23页 |
| ·蛋白质样品的上样前处理及电泳 | 第23-24页 |
| ·凝胶的染色与脱色 | 第24页 |
| 结果 | 第24-28页 |
| 1.猪胃总RNA的提取结果 | 第24-25页 |
| 2.pGhreIin cDNA片段的RT-PCR扩增结果 | 第25页 |
| 3.pGhreIin克隆载体的构建 | 第25-26页 |
| ·PCR产物克隆 | 第25页 |
| ·克隆质粒的酶切鉴定 | 第25页 |
| ·克隆质粒的PCR鉴定 | 第25-26页 |
| 4.表达载体与目的基因的连接与转化 | 第26-28页 |
| ·质粒酶切鉴定 | 第26页 |
| ·质粒PCR鉴定 | 第26-28页 |
| 5.重组基因的诱导表达 | 第28页 |
| 讨论 | 第28-29页 |
| 小结 | 第29-30页 |
| 试验二 猪Ghrelin蛋白多克隆抗体的制备 | 第30-34页 |
| 材料 | 第30-31页 |
| 1.试验动物及免疫原 | 第30页 |
| 2.主要试剂 | 第30页 |
| 3 主要仪器设备 | 第30-31页 |
| 4.相关配制试剂 | 第31页 |
| ·蛋白电泳相关试剂 | 第31页 |
| ·Western blot试剂 | 第31页 |
| ·Buffer A配方 | 第31页 |
| 方法 | 第31-33页 |
| 1.Ghrelin包涵体的提取 | 第31-32页 |
| 2 动物免疫 | 第32页 |
| 3.抗体的纯化与检测 | 第32-33页 |
| ·抗体纯化 | 第32页 |
| ·Western blot检测 | 第32-33页 |
| 结果 | 第33页 |
| 1.Ghrelin包涵体蛋白多克隆抗体 | 第33页 |
| 2.Western-blot检测Ghrelin包涵体蛋白多克隆抗体特异性 | 第33页 |
| 讨论 | 第33-34页 |
| 结论 | 第34-35页 |
| 参考文献 | 第35-40页 |
| 致谢 | 第40页 |
