| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-12页 |
| 缩略语表(Abbreviation) | 第12-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-26页 |
| ·杆状病毒简介 | 第14页 |
| ·昆虫杆状病毒表达载体系统简介 | 第14-18页 |
| ·杆状病毒表达系统的构建策略 | 第15-16页 |
| ·杆状病毒表达系统的应用 | 第16-18页 |
| ·重组杆状病毒介导的哺乳动物细胞内的基因转移 | 第18-23页 |
| ·哺乳动物启动子介导的外源基因的表达 | 第19-20页 |
| ·重组杆状病毒侵入哺乳动物细胞的机制 | 第20-21页 |
| ·重组杆状病毒对于哺乳动物细胞系的选择性 | 第21-22页 |
| ·影响基因转移效率及表达效率的因素 | 第22页 |
| ·重组杆状病毒作为哺乳动物体内基因投送载体 | 第22-23页 |
| ·甲病毒复制子 | 第23-26页 |
| ·基于甲病毒复制子RNA疫苗 | 第24页 |
| ·"自主复制型"RNA疫苗增强免疫反应的作用机制 | 第24-26页 |
| 第二章 研究的目的和意义 | 第26-27页 |
| 第三章 材料与方法 | 第27-42页 |
| ·试验材料 | 第27-32页 |
| ·毒株、细胞与菌种 | 第27页 |
| ·载体与质粒 | 第27-29页 |
| ·主要药品 | 第29-30页 |
| ·本研究中所用的寡核苷酸引物 | 第30页 |
| ·主要培养基及其配制 | 第30-31页 |
| ·缓冲液 | 第31-32页 |
| ·实验动物 | 第32页 |
| ·实验方法 | 第32-42页 |
| ·限制性内切酶酶切反应 | 第32-33页 |
| ·PCR产物或酶切产物的电泳检测 | 第33页 |
| ·PCR或酶切产物的回收与纯化 | 第33页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备(氯化钙法) | 第33-34页 |
| ·连接产物的转化 | 第34页 |
| ·质粒的小量制备(改良的碱裂解法) | 第34页 |
| ·质粒的大量制备(碱裂解法) | 第34-35页 |
| ·脂质体介导转化法(Lipfectin2000,Invitrogen Corp.) | 第35页 |
| ·构建重组杆状病毒的操作流程及示意图 | 第35页 |
| ·重组穿梭载体(Bacmid)的构建 | 第35-36页 |
| ·重组穿梭载体(Bacmid)的提取 | 第36-37页 |
| ·重组杆状病毒获得 | 第37页 |
| ·重组杆状病毒转导哺乳动物细胞 | 第37页 |
| ·间接免疫荧光试验(IFA)检测目的蛋白的体外表达 | 第37页 |
| ·重组杆状病毒介导的细胞凋亡检测 | 第37-38页 |
| ·ELISA方法的建立 | 第38-39页 |
| ·小鼠脾淋巴细胞的分离 | 第39页 |
| ·实时荧光定量PCR检测免疫小鼠脾细胞中的IFN-γ相对表水平 | 第39-40页 |
| ·IFN-γ的定量检测(双抗体夹心ELISA) | 第40-41页 |
| ·统计学方法 | 第41-42页 |
| 第四章 结果与分析 | 第42-57页 |
| ·重组杆状病毒Bac-CMV/SFV-EGFP和Bac-CMV-EGFP的构建 | 第42-49页 |
| ·转移载体pFB-CMV/SFV-EGFP及pFB-CMV-EGFP构建 | 第42-43页 |
| ·重组Bacmid的获得及鉴定 | 第43-44页 |
| ·重组杆状病毒的获得 | 第44页 |
| ·重组杆状病毒介导的外源基因EGFP在哺乳动物细胞中的表达 | 第44-46页 |
| ·转导条件对外源基因表达的影响 | 第46-48页 |
| ·由杆状病毒引起的受转导细胞的凋亡 | 第48-49页 |
| ·VSV-G修饰的重组杆状病毒Bac-G-CMV/SFV-EGFP的构建 | 第49-53页 |
| ·VSV-G修饰的重组杆状病毒载体的构建 | 第49页 |
| ·VSV-G修饰的重组杆状病毒的获得 | 第49页 |
| ·重组杆状病毒Bac-G-CMV/SFV-EGFP在哺乳动物细胞上的表达 | 第49-51页 |
| ·VSV-G修饰的重组杆状病毒Bac-G-CMV/SFV-EGFP的小鼠免疫试验 | 第51-53页 |
| ·VSV-G修饰的重组杆状病毒Bac-G-CMV/SFV-HA的构建 | 第53-57页 |
| ·VSV-G修饰的重组杆状病毒Bac-G-CMV/SFV-HA的获得 | 第53页 |
| ·间接免疫荧光检测重组杆状病毒Bac-G-CMV/SFV-HA中HA基因的表达 | 第53-54页 |
| ·重组杆状病毒Bac-G-CMV/SFV-HA的小鼠免疫试验 | 第54-57页 |
| 第五章 讨论与结论 | 第57-61页 |
| ·讨论 | 第57-60页 |
| ·SFV复制子对杆状病毒载体的影响 | 第57页 |
| ·影响杆状病毒转导哺乳动物细胞的因素 | 第57-58页 |
| ·细胞凋亡与免疫反应 | 第58页 |
| ·VSV-G对杆状病毒载体的修饰 | 第58-59页 |
| ·重组杆状病毒诱导的免疫应答 | 第59-60页 |
| ·结论 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-67页 |
| 致谢 | 第67-68页 |
| 附录 | 第68页 |
