| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-10页 |
| 第一章 前言 | 第10-17页 |
| ·海藻糖的结构和自然界分布 | 第10页 |
| ·海藻糖的生物功能 | 第10-11页 |
| ·海藻糖的应用前景 | 第11-12页 |
| ·海藻糖的制备方法和研究进展 | 第12-14页 |
| ·酶分子改造的理论基础及研究进展 | 第14-15页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第15-16页 |
| ·技术路线 | 第16-17页 |
| 第二章 材料与方法 | 第17-34页 |
| ·实验材料 | 第17-18页 |
| ·菌株与质粒 | 第17页 |
| ·酶与试剂 | 第17-18页 |
| ·主要仪器设备 | 第18页 |
| ·方法与步骤 | 第18-34页 |
| ·大肠杆菌感受态的制备 | 第18-19页 |
| ·质粒DNA的大量制备 | 第19页 |
| ·质粒DNA的小量制备 | 第19-20页 |
| ·重组质粒pSE380-tres-gluhis的构建 | 第20-23页 |
| ·重组菌株的诱导表达 | 第23页 |
| ·蛋白质的SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第23-24页 |
| ·海藻糖合成酶的纯化 | 第24-25页 |
| ·海藻糖合成酶的活力测定 | 第25页 |
| ·蛋白质浓度测定 | 第25页 |
| ·同源建模 | 第25页 |
| ·谷氨酸棒杆菌海藻糖合成酶突变库的构建 | 第25-31页 |
| ·野生型和突变酶的表达、纯化和酶学性质比较 | 第31-34页 |
| 第三章 结果与分析 | 第34-47页 |
| ·带有6His标记的谷氨酸海藻糖合成酶基因(pSE380-tres-gluhis)的克隆、表达和纯化 | 第34-36页 |
| ·tres-gluhis基因的克隆 | 第34页 |
| ·PCR产物与载体的酶切与连接 | 第34-35页 |
| ·野生型酶的表达、纯化及SDS-PAGE分析 | 第35-36页 |
| ·谷氨酸棒杆菌海藻糖合成酶的同源建模 | 第36-37页 |
| ·ProSa2003软件对突变位点的能量分析 | 第37-39页 |
| ·突变型海藻糖合成酶基因表达质粒的构建 | 第39-40页 |
| ·突变型海藻糖合成酶基因的序列分析 | 第40页 |
| ·突变型和野生型海藻糖合成酶的纯化和SDS-PAGE分析 | 第40-41页 |
| ·野生型和突变酶酶学性质分析比较 | 第41-47页 |
| ·野生酶和突变酶的酶活及比活力的测定 | 第41-42页 |
| ·最适温度的测定 | 第42-43页 |
| ·最适pH的测定 | 第43-44页 |
| ·热稳定性的测定 | 第44-45页 |
| ·Km值的测定 | 第45-47页 |
| 第四章 讨论 | 第47-50页 |
| ·海藻糖合成酶突变位点的选择 | 第47页 |
| ·海藻糖合成酶最适温度的改变对海藻糖生产的应用价值 | 第47-48页 |
| ·突变对海藻糖合成酶酶学性质的影响 | 第48页 |
| ·ProSa2003软件对突变位点的稳定性分析 | 第48-50页 |
| 第五章 结论与展望 | 第50-52页 |
| ·结论 | 第50-51页 |
| ·问题与展望 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-59页 |
| 附录1 | 第59-63页 |
| 附录2 | 第63-69页 |
| 致谢 | 第69-70页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第70页 |
