绿色木霉葡聚糖内切酶Ⅰ基因在大肠杆菌中的表达与分子改造
| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-12页 |
| 第一章 前言 | 第12-22页 |
| ·燃料乙醇与纤维素 | 第12-13页 |
| ·纤维素与纤维素酶 | 第13-17页 |
| ·纤维素的结构 | 第13-14页 |
| ·纤维素的应用现状 | 第14页 |
| ·纤维素酶系与降解纤维素机理 | 第14-16页 |
| ·内切葡聚糖酶的分子结构 | 第16-17页 |
| ·纤维素酶基因工程菌的发展 | 第17-18页 |
| ·纤维素酶基因工程菌的发展现状 | 第17-18页 |
| ·大肠杆菌表达纤维素酶的研究意义 | 第18页 |
| ·酶分子定向进化技术与纤维素酶 | 第18-20页 |
| ·酶分子定向进化技术 | 第18-19页 |
| ·定向进化技术的选择 | 第19-20页 |
| ·本实验的研究目的与步骤 | 第20-22页 |
| ·本实验的研究目的 | 第20-21页 |
| ·本实验的技术路线 | 第21-22页 |
| 第二章 材料与方法 | 第22-42页 |
| ·材料 | 第22-25页 |
| ·菌株与质粒 | 第22页 |
| ·酶与试剂 | 第22-23页 |
| ·主要仪器设备 | 第23页 |
| ·培养条件 | 第23-24页 |
| ·常规试剂、溶液和缓冲液 | 第24-25页 |
| ·方法与步骤 | 第25-42页 |
| ·大肠杆菌感受态的制备 | 第25页 |
| ·质粒DNA的小量制备 | 第25-26页 |
| ·酿酒酵母质粒的提取 | 第26页 |
| ·引物设计 | 第26-27页 |
| ·DNA的酶切与连接 | 第27-29页 |
| ·连接产物对大肠杆菌感受态细胞的转化 | 第29页 |
| ·阳性克隆的筛选 | 第29页 |
| ·重组菌株的平板酶活检测 | 第29-30页 |
| ·重组菌株的液体诱导表达 | 第30页 |
| ·外源基因在大肠杆菌中的表达检测 | 第30页 |
| ·蛋白质的SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第30页 |
| ·EGI酶的纯化 | 第30-31页 |
| ·葡聚糖内切酶的活力测定 | 第31页 |
| ·葡萄糖标准曲线的制作 | 第31-32页 |
| ·蛋白质浓度测定 | 第32-33页 |
| ·内切葡聚糖酶定点突变库的构建 | 第33-40页 |
| ·野生型和突变酶动力学性质测定 | 第40-42页 |
| 第三章 结果与分析 | 第42-52页 |
| ·野生型eg1基因在大肠杆菌中的表达 | 第42-44页 |
| ·表达重组质粒的构建 | 第42-43页 |
| ·绿色木霉EG1的酶活验证 | 第43-44页 |
| ·绿色木霉EGⅠ突变体的构建 | 第44-47页 |
| ·突变位点的选定 | 第44-46页 |
| ·突变酶的平板筛选 | 第46-47页 |
| ·酶的纯化、鉴定和酶学性质研究 | 第47-52页 |
| ·酶的纯化 | 第47-48页 |
| ·野生酶和突变酶酶学性质比较 | 第48-49页 |
| ·酶反应的最适温度 | 第49-50页 |
| ·酶反应的最适pH | 第50-51页 |
| ·酶的热稳定性的测定 | 第51-52页 |
| 第四章 讨论 | 第52-55页 |
| ·定点突变点的确定 | 第52-53页 |
| ·突变位点的结果分析 | 第53-55页 |
| 第五章 结论与展望 | 第55-57页 |
| ·结论 | 第55页 |
| ·问题与展望 | 第55-57页 |
| 参考文献 | 第57-66页 |
| 致谢 | 第66-67页 |
| 攻读学位期间发表的论文 | 第67页 |
