| 中文摘要 | 第1-3页 |
| ABSTRACT | 第3-5页 |
| 中文文摘 | 第5-8页 |
| 目录 | 第8-11页 |
| 绪论 | 第11-27页 |
| 1 课题背景 | 第11-14页 |
| ·生物质能定义及其分类 | 第11-12页 |
| ·燃料乙醇的优势及发展方向 | 第12-14页 |
| ·酿酒酵母是乙醇代谢传统菌株 | 第14页 |
| 2 酿酒酵母育种方法的发展 | 第14-17页 |
| ·常规育种 | 第15页 |
| ·原生质体融合育种 | 第15-16页 |
| ·分子育种 | 第16-17页 |
| 3 基因敲除技术 | 第17-22页 |
| ·利用插入突变进行基因敲除 | 第17-18页 |
| ·RNAi基因敲除 | 第18-19页 |
| ·利用同源重组进行基因敲除 | 第19-22页 |
| ·Cre/loxP系统在基因敲除中的应用 | 第20-21页 |
| ·酵母基因敲除技术的建立与改进 | 第21-22页 |
| 4 酿酒酵母乙醇代谢途径研究进展 | 第22-26页 |
| ·乙醇脱氢酶的研究 | 第23-24页 |
| ·乙醛脱氢酶的研究 | 第24页 |
| ·Snf1蛋白酶复合体的研究 | 第24-26页 |
| 5 本研究目的意义 | 第26-27页 |
| 第一章 材料与方法 | 第27-45页 |
| 第一节 实验材料 | 第27-33页 |
| ·菌株与质粒 | 第27页 |
| ·培养基 | 第27-28页 |
| ·寡聚核苷酸引物 | 第28-29页 |
| ·酶和试剂 | 第29-30页 |
| ·主要仪器 | 第30页 |
| ·试剂与溶液的配制 | 第30-33页 |
| 第二节 实验方法 | 第33-45页 |
| ·长侧翼同源区PCR(LFH-PCR) | 第33页 |
| ·Cre/LoxP系统 | 第33-34页 |
| ·高乙醇耐受性菌株的筛选 | 第34页 |
| ·酵母基因组DNA的提取 | 第34页 |
| ·聚合酶链式反应(PCR) | 第34-35页 |
| ·菌落PCR验证酵母菌落 | 第35页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第35-36页 |
| ·质粒pUG6和pSH65的转化 | 第36-37页 |
| ·碱裂解法制备pUG6和pSH65质粒DNA | 第37页 |
| ·UNIQ-10柱式DNA胶回收试剂盒回收DNA | 第37-38页 |
| ·乙醇沉淀DNA | 第38页 |
| ·平板影印法 | 第38-39页 |
| ·LiAc/SS载体DNA/PEG高效酵母转化法 | 第39-40页 |
| ·发酵液相关分析方法 | 第40-45页 |
| 第二章 结果与讨论 | 第45-67页 |
| 第一节 实验结果 | 第45-64页 |
| ·酵母基因组DNA的提取 | 第45页 |
| ·酵母菌SNF1基因存在验证 | 第45-46页 |
| ·质粒pUG6和pSH65的扩增和鉴定 | 第46-49页 |
| ·质粒pUG6和pSH65的扩增 | 第46-47页 |
| ·质粒pUG6的酶切验证 | 第47-48页 |
| ·质粒pSH65的酶切验证 | 第48-49页 |
| ·LFH-PCR法构建SNF1基因敲除组件 | 第49-52页 |
| ·第一步PCR扩增两长侧翼片断 | 第49-51页 |
| ·第二步PCR合成基因敲除组件 | 第51-52页 |
| ·基因敲除组件测序验证 | 第52-54页 |
| ·SNF1基因的敲除 | 第54-58页 |
| ·SNF1基因敲除组件的转化及克隆子筛选 | 第54页 |
| ·克隆子验证 | 第54-55页 |
| ·kan~r筛选标记的切除 | 第55-57页 |
| ·SNF1等位基因的敲除 | 第57-58页 |
| ·YS_2-Δsnf1::loxp-kan-loxp突变株生物学特性试验 | 第58-64页 |
| ·突变株生长试验测定 | 第58页 |
| ·突变株遗传稳定性试验检测 | 第58-59页 |
| ·突变株酒精耐受性试验 | 第59-60页 |
| ·突变株发酵液乙酸产量测定 | 第60-61页 |
| ·突变株发酵液乙醇产量测定 | 第61-62页 |
| ·突变株发酵液葡萄糖残糖量测定 | 第62-64页 |
| 第二节 讨论 | 第64-67页 |
| 第三章 结论 | 第67-69页 |
| 附录1 波美度、糖度、比重换算表 | 第69-71页 |
| 附录2 主要符号对照表 | 第71-73页 |
| 参考文献 | 第73-81页 |
| 攻读学位期间承担的科研任务与主要成果 | 第81-82页 |
| 致谢 | 第82-83页 |
| 个人简历 | 第83页 |