| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 目录 | 第6-8页 |
| 第一章 绪论 | 第8-20页 |
| ·生物冶金概论 | 第8-9页 |
| ·热休克蛋白GroEL(HSP60) | 第9-18页 |
| ·HSPs简介 | 第9-10页 |
| ·热激蛋白GroEL(HSP60)作用机制 | 第10-17页 |
| ·GroEL(HSP60)的生物学功能 | 第17-18页 |
| ·课题的研究目的和研究内容 | 第18-20页 |
| ·依据和目的 | 第18-19页 |
| ·论文的主要研究内容 | 第19页 |
| ·课题受资助情况 | 第19-20页 |
| 第二章 实验材料和方法 | 第20-31页 |
| ·实验材料 | 第20-23页 |
| ·菌种 | 第20页 |
| ·培养基 | 第20-21页 |
| ·A.ferrooxidans菌基因组抽提试剂 | 第21页 |
| ·PCR产物回收试剂盒 | 第21页 |
| ·DNA快速纯化回收试剂盒(胶回收试剂盒) | 第21页 |
| ·质粒提取试剂 | 第21页 |
| ·ATPase测定 | 第21页 |
| ·不连续体系SDS-PAGE电泳 | 第21-22页 |
| ·SDS-PAGE胶保存试剂及装置 | 第22-23页 |
| ·蛋白亲和纯化试剂 | 第23页 |
| ·实验方法 | 第23-29页 |
| ·PCR扩增 | 第23-24页 |
| ·酶切PCR产物及载体pLM1 | 第24-25页 |
| ·载体和目的片段连接反应 | 第25页 |
| ·转化 | 第25页 |
| ·阳性克隆的筛选 | 第25-26页 |
| ·蛋白质表达转化 | 第26页 |
| ·蛋白质的条件表达 | 第26页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第26-28页 |
| ·蛋白质的纯化 | 第28-29页 |
| ·定点突变 | 第29-30页 |
| ·引物的设计 | 第29页 |
| ·PCR扩增 | 第29页 |
| ·阳性克隆的筛选 | 第29-30页 |
| ·突变蛋白质的表达及纯化 | 第30页 |
| ·测试分析方法 | 第30-31页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第30页 |
| ·紫外分光光度计(UV Scanning) | 第30页 |
| ·分子结构模型图的模拟 | 第30页 |
| ·热量分析所用仪器 | 第30-31页 |
| 第三章 GroEL/GroES的表达纯化和活性测定 | 第31-41页 |
| ·GroEL/GroES蛋白基因的克隆 | 第31-33页 |
| ·目的基因的PCR | 第31-32页 |
| ·连接反应及阳性克隆的筛选 | 第32-33页 |
| ·阳性克隆送样测序 | 第33页 |
| ·GroEL/GroES蛋白的表达与活性测定 | 第33-39页 |
| ·GroEL与GroES蛋白表达条件的确定 | 第33-34页 |
| ·GroEL与GroES蛋白大规模的表达与活性测定 | 第34-35页 |
| ·ATP酶活性测定 | 第35页 |
| ·GroES对GroEL的ATP酶活性的抑制 | 第35-36页 |
| ·分子伴侣活性测定 | 第36-37页 |
| ·GroEL序列的同源比对 | 第37-39页 |
| ·GroEL分子结构模型图 | 第39页 |
| ·本章小结 | 第39-41页 |
| 第四章 GroEL定点突变及微量热法研究其性质 | 第41-46页 |
| ·GroEL定点突变 | 第41页 |
| ·突变蛋白质的表达、纯化 | 第41页 |
| ·突变蛋白质的SDS-PAGE电泳检测 | 第41-42页 |
| ·突变蛋白ATP酶活性检测 | 第42页 |
| ·微量热法分析不同离子对GroEL活性影响 | 第42-44页 |
| ·本章小结 | 第44-46页 |
| 第五章 结论 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-54页 |
| 致谢 | 第54-55页 |
| 攻读学位期间主要的研究成果 | 第55页 |