| 中文摘要 | 第1-6页 |
| 英文摘要 | 第6-13页 |
| 第一章 前言 | 第13-21页 |
| 1.耐酸性α-淀粉酶的特性 | 第13-16页 |
| ·耐酸性α-淀粉酶的作用特性 | 第13-14页 |
| ·耐酸性α-淀粉酶在酸性条件下的稳定性 | 第14页 |
| ·耐酸性α-淀粉酶的耐酸性机制 | 第14-15页 |
| ·酸性α-淀粉酶的组分差异 | 第15-16页 |
| 2.我国淀粉深加工行业对于淀粉酶的需求 | 第16页 |
| 3.耐酸性α-淀粉酶的应用 | 第16-18页 |
| ·用于改进淀粉质原料的前处理工艺 | 第17页 |
| ·用于酿造业生产 | 第17-18页 |
| ·用于药物开发 | 第18页 |
| 4.耐酸性α-淀粉酶的研究概况 | 第18-20页 |
| 5.本研究的目的意义及主要内容 | 第20-21页 |
| ·目的及意义 | 第20页 |
| ·主要研究内容 | 第20-21页 |
| 第二章 实验部分 | 第21-53页 |
| 第一部分 耐酸性α-淀粉酶高产菌株的选育及其酶学性质研究 | 第21-36页 |
| 1.实验材料 | 第21-22页 |
| ·土样来源 | 第21页 |
| ·培养基 | 第21-22页 |
| ·主要设备与试剂 | 第22页 |
| ·主要设备 | 第22页 |
| ·实验试剂 | 第22页 |
| 2.方法 | 第22-24页 |
| ·菌种的分离、筛选及鉴定 | 第22-23页 |
| ·土样采集方法 | 第22页 |
| ·酸性α-淀粉酶产生菌的初筛 | 第22-23页 |
| ·酸性α-淀粉酶产生菌的复筛 | 第23页 |
| ·菌种鉴定 | 第23页 |
| ·诱变育种 | 第23-24页 |
| ·菌液制备 | 第23页 |
| ·紫外线(UV)诱变 | 第23页 |
| ·亚硝基胍(NG)诱变 | 第23页 |
| ·遗传稳定性实验 | 第23-24页 |
| ·酶学性质研究 | 第24页 |
| ·粗酶制备 | 第24页 |
| ·酶的最适反应温度 | 第24页 |
| ·酶的最适反应pH | 第24页 |
| ·酶的热稳定性 | 第24页 |
| ·酶的酸稳定性 | 第24页 |
| ·酶的K_m值 | 第24页 |
| ·Ca~(2+)对酶活性的影响 | 第24页 |
| 3.分析与测定 | 第24-26页 |
| ·耐酸性α-淀粉酶活力的测定 | 第24-25页 |
| ·所用试剂 | 第24-25页 |
| ·测定方法 | 第25页 |
| ·菌体干重(DCW)测定 | 第25页 |
| ·生长曲线及产酶曲线的测定 | 第25-26页 |
| ·胞外酶测定 | 第26页 |
| ·淀粉水解产物的薄层层析 | 第26页 |
| ·淀粉水解速率的测定 | 第26页 |
| 4.结果与讨论 | 第26-34页 |
| ·耐酸性α-淀粉酶产生菌株的分离、筛选 | 第26-28页 |
| ·菌种筛选结果 | 第26-27页 |
| ·菌种鉴定 | 第27-28页 |
| ·菌种诱变结果 | 第28-30页 |
| ·紫外(UV)诱变结果 | 第28页 |
| ·亚硝基胍(NG)诱变结果 | 第28-29页 |
| ·遗传稳定性实验 | 第29-30页 |
| ·Tx78所产耐酸性α-淀粉酶的主要酶学性质 | 第30-34页 |
| ·液态发酵条件下Tx78菌株的生长及产酶特性 | 第30页 |
| ·胞外酶实验 | 第30-31页 |
| ·酶的最适反应温度 | 第31页 |
| ·酶的最适反应pH值 | 第31-32页 |
| ·酶的热稳定性 | 第32页 |
| ·酶的酸稳定性 | 第32-33页 |
| ·酶的Km值测定 | 第33页 |
| ·Ca~(2+)对酶活性的影响 | 第33页 |
| ·淀粉水解产物的薄层层析 | 第33-34页 |
| ·淀粉水解速率测定 | 第34页 |
| 5.本章小结 | 第34-36页 |
| 第二部分 UNTx78-358菌株产酶发酵条件的优化及其酶的提取工艺条件研究 | 第36-53页 |
| 1.实验材料 | 第36-37页 |
| ·产耐酸性α-淀粉酶菌株 | 第36页 |
| ·培养基 | 第36页 |
| ·主要设备与试剂 | 第36-37页 |
| ·主要设备 | 第36页 |
| ·实验试剂 | 第36页 |
| ·统计分析软件 | 第36-37页 |
| 2.实验方法 | 第37-39页 |
| ·发酵条件研究 | 第37页 |
| ·培养基组成中主要影响因子的确定 | 第37页 |
| ·利用Response Surface Method进行培养基的优化 | 第37-38页 |
| ·不同添加剂对产酶的影响 | 第38页 |
| ·培养基补料发酵实验 | 第38页 |
| ·耐酸性α-淀粉酶的提取方法研究 | 第38页 |
| ·粗酶液的制备 | 第38页 |
| ·粗酶液浓缩 | 第38页 |
| ·酒精沉淀法 | 第38页 |
| ·淀粉酒精沉淀法 | 第38页 |
| ·盐析法 | 第38页 |
| ·酶的干燥 | 第38页 |
| ·酶的纯化 | 第38-39页 |
| ·粗酶沉淀 | 第38-39页 |
| ·CM52纤维素柱层析 | 第39页 |
| ·DE52纤维素柱层析 | 第39页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第39页 |
| 3.分析与测定 | 第39-40页 |
| ·蛋白质含量测定 | 第39页 |
| ·耐酸性α-淀粉酶的活力测定 | 第39页 |
| ·耐酸性α-淀粉酶的分子量测定 | 第39-40页 |
| ·N-末端氨基酸序列的测定 | 第40页 |
| 4.结果与讨论 | 第40-52页 |
| ·发酵条件优化结果 | 第40-41页 |
| ·培养基组成中主要影响因子的确定 | 第41-44页 |
| ·Plackett-Burman试验设计处理及相应值 | 第41-42页 |
| ·黑曲霉Tx-78菌体生长主要影响因子的筛选 | 第42页 |
| ·耐酸性α-淀粉酶产量主要影响因子的筛选 | 第42-44页 |
| ·RSM法优化结果 | 第44-46页 |
| ·最陡爬坡实验设计及其结果 | 第44页 |
| ·确定实验点 | 第44-45页 |
| ·数据分析 | 第45-46页 |
| ·实验验证 | 第46页 |
| ·不同添加剂对酶的影响 | 第46-47页 |
| ·补料发酵实验 | 第47页 |
| ·分离提取工艺研究 | 第47-50页 |
| ·酒精沉淀对酶的分离的影响 | 第47-48页 |
| ·淀粉酒精沉淀法对酶的分离的影响 | 第48页 |
| ·硫酸铵盐析对酶的分离提取的影响 | 第48-49页 |
| ·提取工艺的确定 | 第49-50页 |
| ·耐酸性α-淀粉酶的纯化结果 | 第50-52页 |
| ·CM52纤维素阳离子交换柱层析 | 第50页 |
| ·DE52纤维素阴离子交换柱层析 | 第50-51页 |
| ·SDS-PAGE凝胶电泳检测结果 | 第51-52页 |
| ·耐酸性α-淀粉酶的N-末端氨基酸序列测定 | 第52页 |
| 5.本章小结 | 第52-53页 |
| 第三章 总结与展望 | 第53-55页 |
| 参考文献 | 第55-60页 |
| 攻读硕士学位期间取得的学术成果 | 第60-61页 |
| 致谢 | 第61页 |
