| 中文摘要 | 第1-11页 |
| Abstract | 第11-14页 |
| 缩略语表(Abbreviation) | 第14-16页 |
| 1 文献综述 | 第16-45页 |
| ·弓形虫的生活史与形态 | 第16-19页 |
| ·弓形虫不同的发育形态 | 第16-17页 |
| ·弓形虫生活史 | 第17-19页 |
| ·在终末宿主(猫科动物)体内的发育 | 第18页 |
| ·在中间宿主(其它动物)体内的发育 | 第18-19页 |
| ·弓形虫与弓形虫病的发现及其危害 | 第19-25页 |
| ·弓形虫与弓形虫病的发现 | 第19-20页 |
| ·弓形虫病的危害 | 第20-22页 |
| ·猪弓形虫病与公共卫生的关系 | 第22页 |
| ·流行病学 | 第22-25页 |
| ·感染源 | 第22-23页 |
| ·流行情况 | 第23-24页 |
| ·弓形虫病当前流行的特点 | 第24-25页 |
| ·致病作用与病理变化 | 第25页 |
| ·弓形虫的主要基因与蛋白质 | 第25-29页 |
| ·弓形虫表面抗原 | 第25-26页 |
| ·P30基因及其编码蛋白质 | 第26页 |
| ·P22基因及其编码蛋白质 | 第26页 |
| ·弓形虫棒状体蛋白 | 第26-27页 |
| ·ROP1基因及其编码蛋白质 | 第27页 |
| ·ROP2基因及其编码蛋白质 | 第27页 |
| ·弓形虫微线体蛋白 | 第27-28页 |
| ·MIC1基因及其编码蛋白质 | 第27页 |
| ·MIC2基因及其编码蛋白质 | 第27-28页 |
| ·MIC3基因及其编码蛋白质 | 第28页 |
| ·弓形虫致密颗粒蛋白 | 第28-29页 |
| ·GRA1及GRA2 | 第28-29页 |
| ·GRA4基因及其编码蛋白质 | 第29页 |
| ·GRA7基因及其编码蛋白质 | 第29页 |
| ·弓形虫病的免疫应答 | 第29-31页 |
| ·先天性免疫 | 第29-30页 |
| ·获得性免疫 | 第30-31页 |
| ·体液免疫 | 第30页 |
| ·细胞免疫 | 第30-31页 |
| ·弓形虫病的诊断方法研究进展 | 第31-36页 |
| ·病原学检查 | 第31页 |
| ·免疫学抗体诊断 | 第31-34页 |
| ·染色试验(Sabin-Feldman dye test,DT) | 第31-32页 |
| ·间接血凝试验(Indirect hemagglutination test,IHA) | 第32页 |
| ·乳胶凝集试验(Latex agglutination test,LAT) | 第32-33页 |
| ·酶联免疫吸附试验(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA) | 第33页 |
| ·间接免疫荧光试验(Indirect immunofluorescent assay,IFA) | 第33-34页 |
| ·检测抗原 | 第34页 |
| ·循环抗原(circulating antigen,CAg)检测 | 第34页 |
| ·循环免疫复合物(circulating immunocomplex,CIC)检测 | 第34页 |
| ·基因诊断 | 第34-36页 |
| ·DNA探针 | 第34-35页 |
| ·PCR技术 | 第35页 |
| ·环介导等温扩增(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP) | 第35-36页 |
| ·弓形虫病疫苗的类型 | 第36-42页 |
| ·弓形虫全虫疫苗 | 第36页 |
| ·弓形虫虫体特异组分疫苗 | 第36-37页 |
| ·基因工程疫苗 | 第37-40页 |
| ·亚单位疫苗 | 第37-38页 |
| ·核酸疫苗 | 第38页 |
| ·复合疫苗 | 第38-39页 |
| ·多表位疫苗 | 第39-40页 |
| ·基因工程活载体疫苗 | 第40页 |
| ·疫苗佐剂的应用 | 第40-41页 |
| ·疫苗的免疫方式 | 第41-42页 |
| ·伪狂犬病病毒作为动物病毒疫苗活载体的研究 | 第42-45页 |
| ·动物病毒作为疫苗活载体的优越性及其特点 | 第42-43页 |
| ·伪狂犬病病毒概述 | 第43页 |
| ·伪狂犬病病毒作为活病毒载体的可行性及应用前景 | 第43-45页 |
| 2 研究的目的与意义 | 第45-47页 |
| 3 材料与方法 | 第47-66页 |
| ·试验材料 | 第47-53页 |
| ·菌株、虫株、毒株、细胞及实验动物 | 第47页 |
| ·载体与质粒 | 第47-48页 |
| ·主要药品及试剂 | 第48-49页 |
| ·培养基与抗生素及其配制 | 第49-50页 |
| ·缓冲液 | 第50-52页 |
| ·质粒提取用缓冲液 | 第50页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)缓冲液 | 第50-51页 |
| ·Western blot缓冲液 | 第51页 |
| ·ELISA缓冲液 | 第51-52页 |
| ·其它缓冲液 | 第52页 |
| ·本研究中所用的寡核苷酸引物 | 第52-53页 |
| ·实验方法 | 第53-66页 |
| ·弓形虫MIC3-LAMP扩增体系的建立 | 第53-54页 |
| ·LAMP扩增体系的建立 | 第53-54页 |
| ·LAMP引物的设计 | 第54页 |
| ·LAMP扩增体系的优化 | 第54页 |
| ·LAMP方法的特异性 | 第54页 |
| ·LAMP方法的敏感性 | 第54页 |
| ·LAMP产物的检测方法 | 第54页 |
| ·LAMP方法的临床应用 | 第54页 |
| ·限制性内切酶酶切反应 | 第54-55页 |
| ·PCR产物或酶切产物的电泳检测 | 第55页 |
| ·PCR产物或酶切产物回收与纯化 | 第55-56页 |
| ·外源DNA片段与质粒载体的连接反应 | 第56页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备(氯化钙法) | 第56页 |
| ·连接产物的转化 | 第56-57页 |
| ·质粒的制备与鉴定 | 第57-59页 |
| ·质粒的小量制备(碱裂解法) | 第57页 |
| ·质粒的大量制备(碱裂解法) | 第57-58页 |
| ·质粒DNA的定量 | 第58-59页 |
| ·重组质粒(阳性质粒)的鉴定 | 第59页 |
| ·病毒的增殖 | 第59页 |
| ·PRV病毒基因组的提取 | 第59-60页 |
| ·共转染 | 第60页 |
| ·空斑筛选纯化 | 第60-61页 |
| ·PCR检测外源基因在重组病毒中的整合 | 第61页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第61页 |
| ·Western blot | 第61-62页 |
| ·病毒TCID_(50)的测定 | 第62页 |
| ·二价基因工程疫苗的动物试验 | 第62页 |
| ·病毒微量中和试验(固定病毒-稀释血清法) | 第62-63页 |
| ·ELISA操作步骤 | 第63页 |
| ·细胞免疫的检测 | 第63-64页 |
| ·小鼠脾淋巴细胞的制备 | 第63页 |
| ·淋巴细胞增殖反应试验(Lymphocytes Proliferation) | 第63-64页 |
| ·IL-2、IL-4、IL-10、IFN-γ的定量检测 | 第64页 |
| ·构建重组伪狂犬病毒的技术路线 | 第64-65页 |
| ·统计学方法 | 第65-66页 |
| 4 结果和分析 | 第66-87页 |
| ·基于弓形虫MIC3基因环介导等温扩增诊断方法的建立 | 第66-72页 |
| ·LAMP引物的设计 | 第66页 |
| ·LAMP扩增体系的优化 | 第66-68页 |
| ·LAMP方法的特异性 | 第68-69页 |
| ·LAMP方法的敏感性 | 第69页 |
| ·LAMP产物的检测方法 | 第69-70页 |
| ·LAMP方法的临床应用 | 第70-72页 |
| ·三株分别表达弓形虫SAG1、MIC3、GRA7基因重组PRV的构建以及生物学特性研究 | 第72-80页 |
| ·转移载体的构建 | 第72-74页 |
| ·重组伪狂犬病毒PRV Ea TK~-/gG~-/SAG1(orMIC3,orGRA7)~+株的构建 | 第74-76页 |
| ·重组伪狂犬病毒PRV Ea TK~-/gG~-/SAG1(orMIC3,orGRA7)~+的生物学特征 | 第76-80页 |
| ·Western-blotting分析重组伪狂犬病毒 | 第76-77页 |
| ·重组伪狂犬病毒的遗传稳定性 | 第77-78页 |
| ·外源基因的插入对重组病毒在细胞上增殖滴度的影响 | 第78-79页 |
| ·重组病毒的安全性试验 | 第79-80页 |
| ·重组病毒作为二价基因工程疫苗的小鼠动物实验 | 第80-87页 |
| ·重组伪狂犬病病毒免疫后小鼠中抗弓形虫抗体水平的检测 | 第80-82页 |
| ·伪狂犬病病毒的中和抗体水平检测 | 第82-83页 |
| ·重组病毒免疫小鼠淋巴细胞增殖检测 | 第83-84页 |
| ·ELISA检测免疫小鼠脾细胞中IFN-γ、IL-2、IL-4和IL-10表达水平分析 | 第84-86页 |
| ·重组病毒疫苗对小鼠免疫保护力试验 | 第86-87页 |
| 5 讨论与结论 | 第87-92页 |
| ·讨论 | 第87-91页 |
| ·弓形虫环介导等温扩增诊断方法的建立与应用 | 第87-88页 |
| ·伪狂犬病毒作为T.gondii疫苗载体的优越性 | 第88页 |
| ·共转染与空斑纯化 | 第88-89页 |
| ·外源基因在重组病毒中的表达 | 第89页 |
| ·弓形虫重组伪狂犬病毒疫苗诱导的免疫应答 | 第89-90页 |
| ·弓形虫重组伪狂犬病毒疫苗联合免疫与单独免疫的保护力比较 | 第90-91页 |
| ·结论 | 第91-92页 |
| 参考文献 | 第92-104页 |
| 附录1 | 第104-106页 |
| 致谢 | 第106页 |
