| 摘要 | 第5-10页 |
| abstract | 第10-15页 |
| 英文缩略词(Abbreviations) | 第21-22页 |
| 第一部分 旋毛虫成虫排泄分泌抗原的血清学诊断 | 第22-37页 |
| 1 材料和方法 | 第23-28页 |
| 1.1 主要试剂 | 第23页 |
| 1.2 主要仪器 | 第23页 |
| 1.3 试剂的配方 | 第23-25页 |
| 1.4 寄生虫和实验动物 | 第25页 |
| 1.5 血清样本的收集和制备 | 第25-26页 |
| 1.6 旋毛虫肌幼虫,肠道感染性幼虫和成虫的收集 | 第26页 |
| 1.7 ELISA法检测旋毛虫感染血清 | 第26-27页 |
| 1.8 SDS-PAGE蛋白分析和Western-blot鉴定 | 第27-28页 |
| 1.9 统计学分析 | 第28页 |
| 2 结果 | 第28-32页 |
| 2.1 检测成虫ES和可溶最佳包被条件及Cut-off值 | 第28页 |
| 2.2 成虫ES和成虫可溶检测感染不同旋毛虫虫种小鼠感染血清 | 第28-29页 |
| 2.3 成虫ES和成虫可溶检测不同寄生虫感染小鼠血清抗体结果 | 第29页 |
| 2.4 成虫ES和成虫可溶检测旋毛虫感染不同剂量不同天数小鼠血清抗体结果 | 第29-31页 |
| 2.5 检测旋毛虫和其他寄生虫染的病人血清中抗旋毛虫抗体水平 | 第31-32页 |
| 3 讨论 | 第32-34页 |
| 4 小结 | 第34页 |
| 参考文献 | 第34-37页 |
| 第二部分 旋毛虫丝氨酸蛋白酶(TsSP)的克隆表达及功能鉴定 | 第37-80页 |
| 1 材料和方法 | 第37-49页 |
| 1.1 主要实验试剂 | 第37-38页 |
| 1.2 主要仪器 | 第38页 |
| 1.3 试剂配方 | 第38-39页 |
| 1.4 旋毛虫种、实验动物、菌体 | 第39-40页 |
| 1.5 在线预测TsSP蛋白的理化性质 | 第40页 |
| 1.6 TsSP序列比对及进化树的构建 | 第40页 |
| 1.7 设计TsSP的 PCR扩增引物 | 第40页 |
| 1.8 收集旋毛虫不同虫期的虫体 | 第40页 |
| 1.9 旋毛虫不同虫期总RNA的提取 | 第40-41页 |
| 1.10 RNA反转录制备各个虫期cDNA | 第41页 |
| 1.11 内参基因(GAPDH)检测cDNA质量 | 第41页 |
| 1.12 TsSP目的基因扩增 | 第41页 |
| 1.13 TsSP基因与克隆载体pGEM-T | 第41页 |
| 1.14 制备BL21感受态 | 第41-42页 |
| 1.15 重组质粒转化入感受态中 | 第42页 |
| 1.16 重组菌落PCR鉴定 | 第42页 |
| 1.17 质粒提取步骤 | 第42-43页 |
| 1.18 重组质粒pGEM-TsSP的双酶切和测序鉴定 | 第43页 |
| 1.19 目的基因TsSP与表达载体的连接 | 第43页 |
| 1.20 菌种冻存 | 第43-44页 |
| 1.21 重组菌的诱导表达及可溶性分析 | 第44页 |
| 1.22 rTsSP蛋白的亲和纯化 | 第44页 |
| 1.23 rTsSP免疫血清的制备及效价的测定 | 第44-45页 |
| 1.24 Western-blot检测rTsSP的抗原性和免疫原性 | 第45页 |
| 1.25 旋毛虫TsSP基因在各个虫期核酸水平的表达 | 第45-46页 |
| 1.29 旋毛虫TsSP蛋白在各个虫期的表达及定量 | 第46页 |
| 1.30 检测TsSP在旋毛虫各个虫体的表达和定位 | 第46-47页 |
| 1.31 ADCC-抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用[9-11] | 第47页 |
| 1.32 体外侵入实验 | 第47-48页 |
| 1.33 rTsSP与肠上皮细胞的特异性结合作用 | 第48-49页 |
| 1.34 rTsSP免疫保护 | 第49页 |
| 1.35 统计学分析 | 第49页 |
| 2 结果 | 第49-75页 |
| 2.1 TsSP生物信息学分析 | 第49-55页 |
| 2.2 旋毛虫TsSP基因引物设计 | 第55页 |
| 2.3 扩增TsSP基因 | 第55页 |
| 2.4 重组质粒PGEM-T-TSsp的测序及序列分析 | 第55-56页 |
| 2.5 重组表达载体的PCR鉴定及双酶切鉴定 | 第56页 |
| 2.6 重组质粒pQE80L-TsSP诱导表达及可溶性分析 | 第56-57页 |
| 2.7 rTsSP的亲和纯化 | 第57页 |
| 2.8 ELISA检测rTsSP免疫血清的效价 | 第57-58页 |
| 2.9 Western-blot分析rTsSP重组蛋白的抗原性 | 第58-59页 |
| 2.10 旋毛虫TsSP基因转录水平的表达 | 第59-60页 |
| 2.11 TsSP蛋白在旋毛虫不同发育虫期蛋白表达水平的鉴定 | 第60-61页 |
| 2.12 IFA检测TsSP蛋白在旋毛虫不同虫期虫体表面的表达及定位 | 第61-63页 |
| 2.13 IFA检测TsSP在旋毛虫不同发育期虫体内部的表达 | 第63-64页 |
| 2.14 抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用(ADCC) | 第64-67页 |
| 2.15 体外侵入 | 第67-68页 |
| 2.16 rTsSP与 IEC的结合作用 | 第68-73页 |
| 2.17 rTsSP诱导免疫类型的鉴定 | 第73-74页 |
| 2.18 rTsSP的免疫保护作用 | 第74-75页 |
| 3 讨论 | 第75-77页 |
| 4 小结 | 第77页 |
| 参考文献 | 第77-80页 |
| 第三部分 rTsSP在旋毛虫病早期诊断及免疫保护中的应用 | 第80-105页 |
| 1 材料和方法 | 第81-84页 |
| 1.1 试剂和仪器 | 第81页 |
| 1.2 蛋白的制备 | 第81页 |
| 1.3 不同感染血清的制备 | 第81页 |
| 1.4 Western-blot检测 | 第81页 |
| 1.5 ELISA检测 | 第81页 |
| 1.6 滴鼻免疫实验方案 | 第81-82页 |
| 1.7 ELISA检测抗体反应 | 第82页 |
| 1.8 肠道冲洗液中sIgA的检 | 第82-83页 |
| 1.9 免疫荧光分析肠道分泌IgA细胞的数量 | 第83页 |
| 1.10 肠道杯状细胞及粘蛋白的鉴定 | 第83-84页 |
| 1.11 细胞因子检测 | 第84页 |
| 1.12 旋毛虫攻击感染小鼠及免疫保护评估 | 第84页 |
| 1.13 统计学分析 | 第84页 |
| 2 结果 | 第84-98页 |
| 2.1 Western-blot检测rTsSP对早期旋毛虫感染血清的识别 | 第84-85页 |
| 2.2 Western-blot分析对rTsSP的敏感性 | 第85-86页 |
| 2.3 rTsSP-ELISA检测其他旋毛虫种属感染小鼠血清结果 | 第86页 |
| 2.4 rTsSP-ELISA检测其他寄生虫感染小鼠血清结果 | 第86-87页 |
| 2.5 rTsSP-ELISA检测旋毛虫感染不同剂量不同时间的小鼠血清 | 第87-88页 |
| 2.6 rTsSP-ELISA检测旋毛虫感染猪血清 | 第88页 |
| 2.7 rTsSP检测旋毛虫和其他寄生虫感染的病人血清 | 第88-90页 |
| 2.8 rTsSP滴鼻免疫所引起的体液免疫应答 | 第90-91页 |
| 2.9 肠道粘膜sIgA应答 | 第91-92页 |
| 2.10 IFA检测旋毛虫天然TsSP在不同期的表达 | 第92页 |
| 2.11 肠道杯状细胞及粘蛋白的检测 | 第92-93页 |
| 2.12 小肠分泌IgA细胞的荧光鉴定 | 第93-94页 |
| 2.13 rTsSP滴鼻免疫后细胞因子的变化 | 第94-96页 |
| 2.14 rTsSP滴鼻免疫后所产生的免疫保护作用 | 第96-98页 |
| 3 讨论 | 第98-100页 |
| 4 小结 | 第100-101页 |
| 参考文献 | 第101-105页 |
| 全文结论 | 第105-106页 |
| 综述 寄生虫丝氨酸蛋白酶功能与旋毛虫病免疫保护的研究 | 第106-129页 |
| 1 丝氨酸蛋白酶和酶的作用机制 | 第106-107页 |
| 2 寄生线虫的丝氨酸蛋白酶 | 第107-115页 |
| 2.1 鞭虫丝氨酸蛋白酶 | 第107-108页 |
| 2.2 简单异尖线虫丝氨酸蛋白酶 | 第108页 |
| 2.3 猪蛔虫丝氨酸蛋白酶 | 第108页 |
| 2.4 丝虫丝氨酸蛋白酶 | 第108-109页 |
| 2.5 犬钩虫丝氨酸蛋白酶 | 第109页 |
| 2.6 小卷蛾斯氏线虫丝氨酸蛋白酶 | 第109-110页 |
| 2.7 绦虫丝氨酸蛋白酶 | 第110-111页 |
| 2.8 吸虫丝氨酸蛋白酶 | 第111-113页 |
| 2.9 旋毛虫丝氨酸蛋白酶 | 第113-115页 |
| 3 旋毛虫病的免疫生物学 | 第115-117页 |
| 4 抗旋毛虫感染疫苗的发展 | 第117-122页 |
| 4.1 虫体提取物和分泌物诱导的保护免疫 | 第117页 |
| 4.2 用于诱导保护预防旋毛虫的免疫途径和佐剂 | 第117-119页 |
| 4.3 重组蛋白和亚型表位所诱导的抗旋毛虫的保护应答 | 第119-120页 |
| 4.4 抗旋毛虫的DNA疫苗 | 第120-121页 |
| 4.5 旋毛虫疫苗的远景 | 第121-122页 |
| 5 结论 | 第122-123页 |
| 参考文献 | 第123-129页 |
| 个人简历及博士期间发表论文 | 第129-131页 |
| 1 个人基本信息 | 第129页 |
| 2 教育背景 | 第129页 |
| 3 发表论文情况 | 第129-130页 |
| 4 获奖荣誉 | 第130页 |
| 5 参加国际会议 | 第130-131页 |
| 致谢 | 第131页 |
