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PKCδ/Cdc25B通路对小鼠受精卵早期发育调控机制的研究

摘要第4-7页
Abstract第7-9页
英文缩略语第10-14页
第一部分 :PKCδ在小鼠1-细胞期受精卵中的表达及定位第14-23页
    1 前言第14-16页
    2 材料和方法第16-20页
        2.1 主要试剂和仪器第16-17页
            2.1.1 主要试剂第16页
            2.1.2 主要仪器第16-17页
        2.2 研究对象和分组第17页
        2.3 研究方法第17-20页
            2.3.1 小鼠超排卵和受精卵的收集第17页
            2.3.2 Real-TimePCR检测第17-19页
            2.3.3 Western blot检测蛋白第19页
            2.3.4 间接免疫荧光定位分析第19页
            2.3.5 数据处理第19-20页
    3 结果第20-22页
        3.1 小鼠1-细胞期受精卵中PKCδ的表达第20-21页
            3.1.1 小鼠1-细胞期受精卵中PKCδ在mRNA水平的表达第20页
            3.1.2 小鼠1-细胞期受精卵中PKCδ在蛋白表达第20-21页
        3.2 小鼠1-细胞期受精卵中PKCδ,Cdc25B的亚细胞定位第21-22页
    4 讨论第22-23页
第二部分 :PKCδ对1-细胞期小鼠受精卵发育的作用第23-33页
    5 前言第23-24页
    6 材料和方法第24-27页
        6.1 主要试剂和仪器第24-25页
            6.1.1 主要试剂第24页
            6.1.2 主要仪器第24-25页
        6.2 研究对象和分组第25页
        6.3 研究方法第25-27页
            6.3.1 小鼠超排卵以及受精卵的收集第25页
            6.3.2 小鼠1-细胞期受精卵发育的观察并统计卵裂率第25页
            6.3.3 siRNA胞浆显微注射观察PKCδ对小鼠受精卵发育的影响第25-26页
            6.3.4 Westernblot检测siRNA的干扰效能,及Cdc2-Tyr15磷酸化状态第26页
            6.3.5 MPF活性测定第26页
            6.3.6 数据处理第26-27页
    7 结果第27-31页
        7.1 PKCδ在1-细胞期小鼠受精卵发育过程中的作用第27-31页
            7.1.1 PKCδ的特异性抑制剂rottlerin对小鼠受精卵的发育的影响第27页
            7.1.2 PKCδ的特异性抑制剂rottlerin对MPF活性的影响第27-28页
            7.1.3 siRNA干扰效能检测第28页
            7.1.4 显微注射siRNA对小鼠受精卵的发育的影响第28-29页
            7.1.5 显微注射siRNA对MPF活性的影响第29页
            7.1.6 Cdc2-Tyr15磷酸化状态检测第29-31页
    8 讨论第31-33页
第三部分 :PKCδ/Cdc25B信号通路对小鼠受精卵早期发育的影响第33-52页
    9 前言第33-34页
    10 材料和方法第34-40页
        10.1 主要试剂和仪器第34-35页
            10.1.1 主要试剂第34-35页
            10.1.2 主要仪器第35页
        10.2 研究对象和分组第35页
        10.3 研究方法第35-40页
            10.3.1 小鼠超排卵和受精卵的收集第35-36页
            10.3.2 突变体的构建第36-37页
            10.3.3 体外转录第37-38页
            10.3.4 mRNA/siRNA显微注射第38页
            10.3.5 MPF活性测定第38页
            10.3.6 Western blot检测Cdc25BSer96,Cdc2-Tyr15磷酸化状态第38-39页
            10.3.7 数据处理第39-40页
    11 结果第40-49页
        11.1 磷酸化位点预测,pBSK-Cdc25B各种突变体双酶切和测序鉴定第40页
        11.2 Cdc25B-mRNAs显微注射对小鼠受精卵发育的影响第40-43页
            11.2.1 显微注射Cdc25B-mRNAs后,在蛋白水平表达的检测第40-41页
            11.2.2 Cdc25-mRNA显微注射对卵裂率的影响第41-42页
            11.2.3 Cdc25-mRNA显微注射对MPF的影响第42页
            11.2.4 Cdc25B-mRNA显微注射对Cdc2-Tyr15磷酸化状态的影响第42-43页
        11.3 Rotterlin抑制PKCδ,显微注射Cdc25B-mRNAs对小鼠受精卵的影响第43-46页
            11.3.1 rotterlin存在条件下,显微注射Cdc25B-mRNAs后,在蛋白水平表达的检测第43页
            11.3.2 rotterlin存在条件下,显微注射Cdc25B-mRNAs后,对卵裂率的影响第43-44页
            11.3.3 rotterlin存在条件下,显微注射Cdc25B-mRNAs后,对MPF活性的影响第44-45页
            11.3.4 rotterlin存在条件下,显微注射Cdc25B-mRNAs后,对Cdc2-Tyr15磷酸化状态的影响第45-46页
        11.4 siRNA显微注射后的干扰效能,Cdc25BSer96磷酸化状态第46页
        11.5 siRNA,Cdc25B-mRNAs共同显微注射对小鼠受精卵发育的影响第46-49页
            11.5.1 siRNA,Cdc25B-mRNAs显微注射后,在蛋白水平表达的检测第46-47页
            11.5.2 siRNA,Cdc25B-mRNAs显微注射后,对受精卵卵裂的影响第47页
            11.5.3 siRNA,Cdc25B-mRNAs显微注射后,对MPF活性的影响第47-48页
            11.5.4 siRNA,Cdc25B-mRNAs显微注射后,对Cdc2-Tyr15磷酸化状态的影响第48-49页
        11.6 小鼠受精卵不同细胞时期96位丝氨酸磷酸化状态的检测第49页
    12 讨论第49-52页
本研究创新性的自我评价第52-53页
参考文献第53-59页
综述第59-68页
    参考文献第63-68页
攻读学位期间取得的研究成果第68-69页
致谢第69-70页
个人简历第70页

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