| 摘要 | 第4-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 英文缩略语 | 第10-14页 |
| 第一部分 ：PKCδ在小鼠1-细胞期受精卵中的表达及定位 | 第14-23页 |
| 1 前言 | 第14-16页 |
| 2 材料和方法 | 第16-20页 |
| 2.1 主要试剂和仪器 | 第16-17页 |
| 2.1.1 主要试剂 | 第16页 |
| 2.1.2 主要仪器 | 第16-17页 |
| 2.2 研究对象和分组 | 第17页 |
| 2.3 研究方法 | 第17-20页 |
| 2.3.1 小鼠超排卵和受精卵的收集 | 第17页 |
| 2.3.2 Real-TimePCR检测 | 第17-19页 |
| 2.3.3 Western blot检测蛋白 | 第19页 |
| 2.3.4 间接免疫荧光定位分析 | 第19页 |
| 2.3.5 数据处理 | 第19-20页 |
| 3 结果 | 第20-22页 |
| 3.1 小鼠1-细胞期受精卵中PKCδ的表达 | 第20-21页 |
| 3.1.1 小鼠1-细胞期受精卵中PKCδ在mRNA水平的表达 | 第20页 |
| 3.1.2 小鼠1-细胞期受精卵中PKCδ在蛋白表达 | 第20-21页 |
| 3.2 小鼠1-细胞期受精卵中PKCδ,Cdc25B的亚细胞定位 | 第21-22页 |
| 4 讨论 | 第22-23页 |
| 第二部分 ：PKCδ对1-细胞期小鼠受精卵发育的作用 | 第23-33页 |
| 5 前言 | 第23-24页 |
| 6 材料和方法 | 第24-27页 |
| 6.1 主要试剂和仪器 | 第24-25页 |
| 6.1.1 主要试剂 | 第24页 |
| 6.1.2 主要仪器 | 第24-25页 |
| 6.2 研究对象和分组 | 第25页 |
| 6.3 研究方法 | 第25-27页 |
| 6.3.1 小鼠超排卵以及受精卵的收集 | 第25页 |
| 6.3.2 小鼠1-细胞期受精卵发育的观察并统计卵裂率 | 第25页 |
| 6.3.3 siRNA胞浆显微注射观察PKCδ对小鼠受精卵发育的影响 | 第25-26页 |
| 6.3.4 Westernblot检测siRNA的干扰效能,及Cdc2-Tyr15磷酸化状态 | 第26页 |
| 6.3.5 MPF活性测定 | 第26页 |
| 6.3.6 数据处理 | 第26-27页 |
| 7 结果 | 第27-31页 |
| 7.1 PKCδ在1-细胞期小鼠受精卵发育过程中的作用 | 第27-31页 |
| 7.1.1 PKCδ的特异性抑制剂rottlerin对小鼠受精卵的发育的影响 | 第27页 |
| 7.1.2 PKCδ的特异性抑制剂rottlerin对MPF活性的影响 | 第27-28页 |
| 7.1.3 siRNA干扰效能检测 | 第28页 |
| 7.1.4 显微注射siRNA对小鼠受精卵的发育的影响 | 第28-29页 |
| 7.1.5 显微注射siRNA对MPF活性的影响 | 第29页 |
| 7.1.6 Cdc2-Tyr15磷酸化状态检测 | 第29-31页 |
| 8 讨论 | 第31-33页 |
| 第三部分 ：PKCδ/Cdc25B信号通路对小鼠受精卵早期发育的影响 | 第33-52页 |
| 9 前言 | 第33-34页 |
| 10 材料和方法 | 第34-40页 |
| 10.1 主要试剂和仪器 | 第34-35页 |
| 10.1.1 主要试剂 | 第34-35页 |
| 10.1.2 主要仪器 | 第35页 |
| 10.2 研究对象和分组 | 第35页 |
| 10.3 研究方法 | 第35-40页 |
| 10.3.1 小鼠超排卵和受精卵的收集 | 第35-36页 |
| 10.3.2 突变体的构建 | 第36-37页 |
| 10.3.3 体外转录 | 第37-38页 |
| 10.3.4 mRNA/siRNA显微注射 | 第38页 |
| 10.3.5 MPF活性测定 | 第38页 |
| 10.3.6 Western blot检测Cdc25BSer96,Cdc2-Tyr15磷酸化状态 | 第38-39页 |
| 10.3.7 数据处理 | 第39-40页 |
| 11 结果 | 第40-49页 |
| 11.1 磷酸化位点预测,pBSK-Cdc25B各种突变体双酶切和测序鉴定 | 第40页 |
| 11.2 Cdc25B-mRNAs显微注射对小鼠受精卵发育的影响 | 第40-43页 |
| 11.2.1 显微注射Cdc25B-mRNAs后,在蛋白水平表达的检测 | 第40-41页 |
| 11.2.2 Cdc25-mRNA显微注射对卵裂率的影响 | 第41-42页 |
| 11.2.3 Cdc25-mRNA显微注射对MPF的影响 | 第42页 |
| 11.2.4 Cdc25B-mRNA显微注射对Cdc2-Tyr15磷酸化状态的影响 | 第42-43页 |
| 11.3 Rotterlin抑制PKCδ,显微注射Cdc25B-mRNAs对小鼠受精卵的影响 | 第43-46页 |
| 11.3.1 rotterlin存在条件下,显微注射Cdc25B-mRNAs后,在蛋白水平表达的检测 | 第43页 |
| 11.3.2 rotterlin存在条件下,显微注射Cdc25B-mRNAs后,对卵裂率的影响 | 第43-44页 |
| 11.3.3 rotterlin存在条件下,显微注射Cdc25B-mRNAs后,对MPF活性的影响 | 第44-45页 |
| 11.3.4 rotterlin存在条件下,显微注射Cdc25B-mRNAs后,对Cdc2-Tyr15磷酸化状态的影响 | 第45-46页 |
| 11.4 siRNA显微注射后的干扰效能,Cdc25BSer96磷酸化状态 | 第46页 |
| 11.5 siRNA,Cdc25B-mRNAs共同显微注射对小鼠受精卵发育的影响 | 第46-49页 |
| 11.5.1 siRNA,Cdc25B-mRNAs显微注射后,在蛋白水平表达的检测 | 第46-47页 |
| 11.5.2 siRNA,Cdc25B-mRNAs显微注射后,对受精卵卵裂的影响 | 第47页 |
| 11.5.3 siRNA,Cdc25B-mRNAs显微注射后,对MPF活性的影响 | 第47-48页 |
| 11.5.4 siRNA,Cdc25B-mRNAs显微注射后,对Cdc2-Tyr15磷酸化状态的影响 | 第48-49页 |
| 11.6 小鼠受精卵不同细胞时期96位丝氨酸磷酸化状态的检测 | 第49页 |
| 12 讨论 | 第49-52页 |
| 本研究创新性的自我评价 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-59页 |
| 综述 | 第59-68页 |
| 参考文献 | 第63-68页 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 | 第68-69页 |
| 致谢 | 第69-70页 |
| 个人简历 | 第70页 |
