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利用计算机辅助设计和定点突变技术初步研究风车棕榈树过氧化物酶(WPTP)N-糖基化位点的功能

摘要第4-5页
Abstract第5页
1 引言第9-21页
    1.1 棕榈树过氧化物酶第9-11页
        1.1.1 过氧化物酶简介第9-10页
        1.1.2 棕榈树过氧化物酶第10-11页
    1.2 棕榈树过氧化物酶糖基化修饰研究第11页
    1.3 毕赤酵母表达系统第11-15页
    1.4 定点突变技术第15-16页
        1.4.1 酶的体外进化第15页
        1.4.2 定点突变第15-16页
    1.5 计算机模拟技术第16-18页
        1.5.1 同源建模第16-17页
        1.5.2 蛋白质与小分子模拟对接第17页
        1.5.3 蛋白质结合位点预测第17-18页
    1.6 本研究内容及意义第18-21页
        1.6.1 棕榈树过氧化物酶在食品上的应用第18页
        1.6.3 具体研究内容第18-19页
        1.6.4 研究方法第19页
        1.6.5 创新点第19-21页
2 材料与方法第21-40页
    2.1 主要试剂和数据来源第21-25页
        2.1.1 菌种和质粒第21页
        2.1.2 试剂与培养基第21-24页
        2.1.3 模拟数据来源第24-25页
    2.2 仪器设备第25页
    2.3 实验方法第25-40页
        2.3.1 引物设计与合成第25-26页
        2.3.2 棕榈树过氧化物酶表达载体质粒的构建第26-31页
        2.3.3 棕榈树过氧化物酶表达载体质粒的突变及电转化第31-35页
        2.3.4 野生型和突变型WPTP在Pichia表达系统中的诱导表达第35页
        2.3.5 重组野生型和突变型WPTP的纯化浓缩和去糖基化第35-36页
        2.3.6 质谱鉴定第36-37页
        2.3.7 过氧化物酶催化活性分析第37页
        2.3.8 同源建模及评价第37-38页
        2.3.9 大分子蛋白质预处理第38-39页
        2.3.10 对接计算第39-40页
3 结果与分析第40-55页
    3.1 构建重组酵母第40-47页
        3.1.1 表达载体的构建结果第40-42页
        3.1.2 酵母重组子的鉴定第42-44页
        3.1.3 WPTP的诱导表达及质谱鉴定第44-47页
        3.1.4 过氧化物酶催化活性分析第47页
    3.2 计算机模拟结果第47-55页
        3.2.1 同源建模及模型评估第47-51页
        3.2.2 对接计算结果第51-55页
4 讨论第55-57页
    4.1 突变结果分析第55页
    4.2 实验结果与建模结果讨论第55-56页
    4.3 对接结果讨论第56页
    4.4 有待进一步研究的内容第56-57页
5 结论第57-58页
参考文献第58-63页
中英文专业名词及英文缩写第63-64页
附录第64-74页
致谢第74页

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