| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 缩略词表 | 第7-11页 |
| 引言 | 第11-15页 |
| 1 实验材料与方法 | 第15-33页 |
| 1.1 材料 | 第15-19页 |
| 1.1.1 病毒 | 第15页 |
| 1.1.2 菌种和质粒 | 第15页 |
| 1.1.3 引物设计 | 第15-16页 |
| 1.1.4 常用试剂 | 第16-17页 |
| 1.1.5 仪器和设备 | 第17-18页 |
| 1.1.6 常用试剂的配制 | 第18-19页 |
| 1.2 实验方法 | 第19-33页 |
| 1.2.1 重组质粒的构建 | 第19-21页 |
| 1.2.2 重组杆状病毒穿梭质粒的构建 | 第21-22页 |
| 1.2.3 重组杆状病毒的制备和鉴定 | 第22-24页 |
| 1.2.4 大肠杆菌原核表达系统IPTG诱导目的蛋白表达 | 第24-25页 |
| 1.2.5 昆虫杆状病毒表达系统目的蛋白大量表达 | 第25页 |
| 1.2.6 SDS-PAGE考染和Western Blot验证 | 第25-26页 |
| 1.2.7 镍柱亲和层析和离子交换层析 | 第26-27页 |
| 1.2.8 ELISA检测蛋白结合活性 | 第27-28页 |
| 1.2.9 NP蛋白最佳标记PH和最佳标记量的选择 | 第28-29页 |
| 1.2.10 样品垫,结合垫,反应垫的制备以及实验原理 | 第29页 |
| 1.2.11 禽流感阳性血清血凝抑制实验 | 第29-30页 |
| 1.2.12 竞争法试纸条检测禽流感样品条件摸索 | 第30页 |
| 1.2.13 双抗原夹心法试纸条检测禽流感样品条件摸索 | 第30页 |
| 1.2.14 双抗原夹心法试纸条特异性检测 | 第30页 |
| 1.2.15 表达的NP抗原免疫小鼠抗体效价检测 | 第30页 |
| 1.2.16 应用双抗原夹心法试纸条评价小鼠免疫效果 | 第30-33页 |
| 2 实验结果 | 第33-52页 |
| 2.1 大肠杆菌原核表达系统表达NP蛋白 | 第33-36页 |
| 2.1.1 H5N1 NP目的基因的扩增 | 第33页 |
| 2.1.2 重组质粒的鉴定 | 第33-34页 |
| 2.1.3 SDS-PAGE考染结果和Western blot验证 | 第34-35页 |
| 2.1.4 蛋白纯化和Western Blot验证 | 第35页 |
| 2.1.5 H5N1 NP蛋白ELISA结合活性实验 | 第35-36页 |
| 2.2 昆虫杆状病毒表达系统表达NP蛋白 | 第36-52页 |
| 2.2.1 H5N1 NP基因扩增结果 | 第36页 |
| 2.2.2 pFastBac1-H5NP重组质粒的鉴定 | 第36-37页 |
| 2.2.3 重组穿梭质粒的鉴定 | 第37-38页 |
| 2.2.4 致细胞病变效应(CPE)检测 | 第38页 |
| 2.2.5 重组杆状病毒基因组PCR鉴定 | 第38-39页 |
| 2.2.6 重组杆状病毒P3代毒力测定 | 第39页 |
| 2.2.7 间接免疫荧光法检测H5N1 NP蛋白的表达情况 | 第39-40页 |
| 2.2.8 Western Blot验证贴壁Sf9细胞H5N1 NP蛋白的表达 | 第40页 |
| 2.2.9 Sf9贴壁细胞到悬浮细胞的驯化 | 第40-41页 |
| 2.2.10 SDS-PAGE和Western Blot验证 | 第41-42页 |
| 2.2.11 离子交换层析蛋白纯化 | 第42页 |
| 2.2.12 ELISA法检测NP蛋白结合活性 | 第42-44页 |
| 2.2.13 NP蛋白最佳标记PH和最佳标记量的选择 | 第44-45页 |
| 2.2.14 竞争法试纸条检测禽流感样品条件摸索 | 第45-47页 |
| 2.2.15 双抗原夹心法试纸条检测禽流感样品条件摸索 | 第47-50页 |
| 2.2.16 ELISA检测免疫小鼠的抗体效价 | 第50页 |
| 2.2.17 双抗原夹心法试纸条评价小鼠免疫效果 | 第50-52页 |
| 3 讨论 | 第52-54页 |
| 结论 | 第54-56页 |
| 参考文献 | 第56-60页 |
| 综述 | 第60-70页 |
| 参考文献 | 第65-70页 |
| 致谢 | 第70-72页 |
| 攻读学位期间研究成果以及参与项目 | 第72-73页 |
