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Alpha B-crystallin与ATP6V1A相互作用调控溶酶体活性的分子机制研究

摘要第4-7页
ABSTRACT第7-9页
缩略词表第12-13页
引言第13-15页
1 材料与方法第15-33页
    1.1 主要实验仪器第15页
    1.2 主要实验试剂第15-16页
    1.3 主要试剂的配制第16-20页
    1.4 实验方法第20-33页
        1.4.1 细胞复苏第20页
        1.4.2 细胞传代第20-21页
        1.4.3 细胞计数与铺板第21页
        1.4.4 细胞转染第21-22页
        1.4.5 细胞冻存第22页
        1.4.6 蛋白质的提取及浓度的测定第22-23页
        1.4.7 WesternBlot第23-25页
        1.4.8 RNA的提取第25页
        1.4.9 反转录第25-26页
        1.4.10 RealtimePCR第26页
        1.4.11 免疫荧光第26-27页
        1.4.12 构建质粒第27-30页
        1.4.13 Pulldown第30页
        1.4.14 溶酶体PH检测第30-31页
        1.4.15 蛋白降解检测第31页
        1.4.16 分离溶酶体第31-33页
2 实验结果第33-47页
    2.1 晶状体上皮细胞中,过表达HSF4b增强蛋白的稳定性第33-34页
    2.2 敲除alphaB-crystallin明显降低Hsf4介导的ATP6V1A的蛋白稳定性第34-36页
    2.3 AlphaB-crystallin缺失促进ATP6V1A的泛素化,促其通过泛素蛋白酶体途径降解第36-39页
    2.4 ATP6V1A与alphaB-crystallin在溶酶体上相互作用第39-40页
    2.5 AlphaB-crystallin只与ATP6V1A亚基相互作用第40-41页
    2.6 AlphaB-crystallin的各截短体与ATP6V1A无相互作用,磷酸化修饰也不参与其与ATP6V1A的相互作用第41-43页
    2.7 mTOR通路参与ATP6V1A与alphaB-crystallin的相互作用,进而调控溶酶体PH第43-47页
3 讨论第47-51页
结论第51-53页
参考文献第53-55页
综述 溶酶体在器官发育中的作用第55-69页
    参考文献第64-69页
致谢第69-71页
在读期间参加的学术活动及研究成果第71-72页

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