| 英文缩略对照表 | 第3-4页 |
| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 引言 | 第13-14页 |
| 第一部分 文献综述 | 第14-32页 |
| 第一章 γ-干扰素诱导的溶酶体巯基还原酶(GILT)的研究进展 | 第15-25页 |
| 1.1 干扰素简介 | 第15-17页 |
| 1.1.1 干扰素及干扰素系统概述 | 第15页 |
| 1.1.2 γ-干扰素及其基因结构 | 第15-16页 |
| 1.1.3 γ-干扰素的作用机理及生物学活性 | 第16-17页 |
| 1.2 溶酶体 | 第17-18页 |
| 1.2.1 溶酶体概述 | 第17页 |
| 1.2.2 溶酶体作用 | 第17-18页 |
| 1.3 γ-干扰素诱导的溶酶体巯基还原酶 | 第18-25页 |
| 1.3.1 硫醇还原酶家族 | 第18页 |
| 1.3.2 γ-干扰素诱导的溶酶体巯基还原酶(GILT) | 第18-19页 |
| 1.3.3 γ-干扰素诱导的溶酶体巯基还原酶的表达、分布及活性特征 | 第19-20页 |
| 1.3.4 γ-干扰素诱导的溶酶体巯基还原酶活性 | 第20-22页 |
| 1.3.5 γ-干扰素诱导的溶酶体巯基还原酶的国内外研究 | 第22-25页 |
| 第二章 溶菌酶的研究进展 | 第25-29页 |
| 2.1 溶菌酶的发现及概述 | 第25页 |
| 2.2 溶菌酶的分子结构及分型 | 第25-26页 |
| 2.3 溶菌酶的分离方法 | 第26-27页 |
| 2.4 溶菌酶的作用机理 | 第27页 |
| 2.5 溶菌酶的应用 | 第27-28页 |
| 2.5.1 医学领域 | 第27页 |
| 2.5.2 食品领域 | 第27页 |
| 2.5.3 科研领域 | 第27-28页 |
| 2.5.4 空气净化方面 | 第28页 |
| 2.5.5 参与机体免疫 | 第28页 |
| 2.6 展望 | 第28-29页 |
| 第三章 关于物种的介绍 | 第29-32页 |
| 3.1 豚鼠 | 第29-30页 |
| 3.1.1 豚鼠的基本简介 | 第29页 |
| 3.1.2 豚鼠的研究价值 | 第29-30页 |
| 3.2 罗非鱼 | 第30页 |
| 3.2.1 罗非鱼的形态特征及其生理特点 | 第30页 |
| 3.2.2 罗非鱼的营养价值 | 第30页 |
| 3.3 家兔 | 第30-32页 |
| 3.3.1 家兔的基本简介 | 第30-31页 |
| 3.3.2 家兔的研究价值 | 第31-32页 |
| 第二部分 实验研究 | 第32-70页 |
| 第四章 豚鼠、罗非鱼γ-干扰素诱导的溶酶体巯基还原酶(GILT)的基因结构、表达以及生物活性鉴定 | 第33-57页 |
| 4.1 实验材料 | 第33-34页 |
| 4.1.1 实验动物,细胞,菌种和质粒 | 第33页 |
| 4.1.2 实验试剂 | 第33-34页 |
| 4.1.3 实验仪器 | 第34页 |
| 4.2 实验方法 | 第34-44页 |
| 4.2.1 豚鼠和罗非鱼GILT基因的克隆 | 第34-39页 |
| 4.2.1.1 豚鼠和罗非鱼脾脏组织总RNA的提取 | 第34-35页 |
| 4.2.1.2 RT-PCR扩增cpGILT和onGLT | 第35-36页 |
| 4.2.1.3 TA克隆 | 第36-37页 |
| 4.2.1.4 Real-Time PCR检测cpGILT和onGILT的组织分布 | 第37-38页 |
| 4.2.1.5 生物信息学分析 | 第38-39页 |
| 4.2.2 重组表达载体pET28a-cpGILT/PET28a-onGILT的表达、纯化及鉴定 | 第39-43页 |
| 4.2.2.1 重组表达载体pET28a-cpGILT/PET28a-onGILT的构建 | 第39-41页 |
| 4.2.2.2 PET28a-cpGILT重组蛋白质的诱导表达 | 第41-42页 |
| 4.2.2.3 PET28a-cpGILT和PET28a-onGILT重组蛋白质的变复性 | 第42页 |
| 4.2.2.4 PET28a-cpGILT和PET28a-onGILT蛋白质的纯化 | 第42-43页 |
| 4.2.2.5 PET28a-cpGILT和PET28a-onGILT蛋白质的Western blotting鉴定 | 第43页 |
| 4.2.3 PET28a-cpGILIT和PET28a-onGILT重组蛋白质的体外活性鉴定 | 第43-44页 |
| 4.2.4 LPS刺激后细胞内免疫荧光分析 | 第44页 |
| 4.3 实验结果与分析 | 第44-56页 |
| 4.3.1 CpGILT基因和onGILT基因的CDS区、氨基酸序列分析 | 第44-46页 |
| 4.3.2 CpGILT和OnGILT基因氨基酸序列比对及进化分析 | 第46-49页 |
| 4.3.3 蛋白结构预测 | 第49-51页 |
| 4.3.4 荧光定量PCR分析cpGILT和onGILT的表达量 | 第51-52页 |
| 4.3.5 原核表达载体PET28a-cpGILT和PET28a-onGILT的构建及相应重组蛋白的表达、纯化及鉴定 | 第52-54页 |
| 4.3.6 CpGILT和onGILT重组蛋白的巯基还原酶活性测定 | 第54-55页 |
| 4.3.7 LPS刺激后细胞内免疫荧光分析(亚细胞定位) | 第55-56页 |
| 4.4 讨论 | 第56-57页 |
| 第五章 家兔溶菌酶(lysozyme)的基因结构,表达和生物学活性分析 | 第57-70页 |
| 5.1 实验材料 | 第57页 |
| 5.1.1 实验动物,菌种和质粒 | 第57页 |
| 5.1.2 实验试剂 | 第57页 |
| 5.1.3 实验仪器 | 第57页 |
| 5.2 实验方法 | 第57-62页 |
| 5.2.1 家兔肾脏组织总RNA的提取 | 第57页 |
| 5.2.2 组织RNA的逆转录 | 第57页 |
| 5.2.3 OcLYZ基因引物的设计及PCR | 第57-58页 |
| 5.2.4 TA克隆 | 第58页 |
| 5.2.5 生物信息学分析 | 第58页 |
| 5.2.6 Real-time PCR检测ocLYZ的组织分布 | 第58-59页 |
| 5.2.7 重组表达载体PET28a-ocLYZ的构建 | 第59-61页 |
| 5.2.7.1 引物设计 | 第59页 |
| 5.2.7.2 PCR扩增反应 | 第59-60页 |
| 5.2.7.3 DNA基因和PET28a载体的双酶切 | 第60页 |
| 5.2.7.4 表达载体PET28a的去磷酸化与DNA基因的磷酸化 | 第60-61页 |
| 5.2.7.5 目的基因和表达载体的连接反应(20ul体系) | 第61页 |
| 5.2.7.6 连接产物的转化 | 第61页 |
| 5.2.8 重组蛋白质PET28a-ocLYZ的诱导表达、纯化及Western blotting鉴定 | 第61-62页 |
| 5.2.9 PET28a-ocLYZ重组蛋白质的体外活性鉴定 | 第62页 |
| 5.2.10 PET28a-ocLYZ重组蛋白质作用的最适温度和pH值测定 | 第62页 |
| 5.3 实验结果 | 第62-69页 |
| 5.3.1 OcLYZ基因序列及其结构特点 | 第62-63页 |
| 5.3.2 氨基酸多重序列比对,三维结构及其进化系统分析 | 第63-66页 |
| 5.3.3 OcLYZ在各个组织中的分布及表达 | 第66页 |
| 5.3.4 重组蛋白质PET28a-ocLYZ的表达、纯化及其western blot鉴定 | 第66-67页 |
| 5.3.5 溶菌酶的活性测定 | 第67-68页 |
| 5.3.6 PET28a-ocLYZ重组蛋白质作用的最适pH和温度 | 第68-69页 |
| 5.4 讨论 | 第69-70页 |
| 全文总结 | 第70-71页 |
| 参考文献 | 第71-77页 |
| 在读期间发表的学术论文及研究成果 | 第77-78页 |
| 致谢 | 第78页 |
