| 摘要 | 第8-11页 |
| Abstract | 第11-14页 |
| 缩略词表 | 第15-16页 |
| 第一章 前言 | 第16-34页 |
| 1.1 课题的提出 | 第16-18页 |
| 1.2 前人研究进展 | 第18-33页 |
| 1.2.1 植物无融合生殖现象及其研究意义 | 第18-20页 |
| 1.2.2 配子体无融合生殖研究进展 | 第20-24页 |
| 1.2.3 孢子体无融合生殖研究进展 | 第24-31页 |
| 1.2.4 无融合生殖的相关基因 | 第31-33页 |
| 1.3 本研究的目的和内容 | 第33-34页 |
| 第二章 柑橘多胚性状的遗传分析 | 第34-55页 |
| 2.1 引言 | 第34-35页 |
| 2.2 材料与方法 | 第35-40页 |
| 2.2.1 实验材料与杂交组合 | 第35-37页 |
| 2.2.2 花粉活性的检测 | 第37页 |
| 2.2.3 杂交授粉 | 第37页 |
| 2.2.4 试管播种 | 第37-38页 |
| 2.2.5 杂交苗的播种及移栽 | 第38页 |
| 2.2.6 杂交苗的DNA提取 | 第38页 |
| 2.2.7 杂种鉴定 | 第38-39页 |
| 2.2.8 杂交子代种子胚性的检验 | 第39页 |
| 2.2.9 BSA-Seq重测序文库的构建、测序及分析 | 第39-40页 |
| 2.2.10 分子标记的开发和应用 | 第40页 |
| 2.2.11 重组单株的筛选与精细定位 | 第40页 |
| 2.2.12 候选基因的功能预测 | 第40页 |
| 2.3 结果与分析 | 第40-51页 |
| 2.3.1 山金柑遗传群体的构建 | 第40-43页 |
| 2.3.2 遗传群体后代的杂种鉴定 | 第43页 |
| 2.3.3 山金柑无融合生殖的表型鉴定 | 第43-44页 |
| 2.3.4 BSA-Seq法对山金柑分离群体的定位 | 第44-45页 |
| 2.3.5 候选区域的SSR标记、Indel标记开发和精细定位 | 第45-47页 |
| 2.3.6 HB×FC分离群体的表型分析 | 第47-48页 |
| 2.3.7 BSA-Seq法对HB×FC分离群体定位的结果 | 第48-49页 |
| 2.3.8 红橘×枳壳杂交群体分离群体的表型与遗传分析 | 第49-51页 |
| 2.3.9 候选区域内候选基因的功能分析 | 第51页 |
| 2.4 讨论 | 第51-55页 |
| 2.4.1 利用山金柑作为柑橘类植物遗传研究的模式植物 | 第51-52页 |
| 2.4.2 多胚率与无融合生殖能力的关系 | 第52-53页 |
| 2.4.3 柑橘属和金柑属中的多胚性状由同一个位点控制 | 第53-55页 |
| 第三章 单多胚山金柑胚珠的比较转录组学分析 | 第55-75页 |
| 3.1 引言 | 第55-56页 |
| 3.2 材料与方法 | 第56-60页 |
| 3.2.1 实验材料 | 第56页 |
| 3.2.2 胚珠发育过程石蜡切片观察 | 第56页 |
| 3.2.3 RNA的提取与cDNA合成 | 第56-57页 |
| 3.2.4 转录组文库构建及测序 | 第57页 |
| 3.2.5 无参转录组的拼接与组装 | 第57-58页 |
| 3.2.6 基因表达水平分析与差异表达分析 | 第58-59页 |
| 3.2.7 qPCR检测基因表达水平 | 第59页 |
| 3.2.8 山金柑子房植物激素的检测 | 第59-60页 |
| 3.3 结果与分析 | 第60-72页 |
| 3.3.1 珠心胚起始发育过程关键时期确定 | 第60页 |
| 3.3.2 RNA-seq测序产量统计与数据质量评估 | 第60-61页 |
| 3.3.3 Denovo转录组组装和注释 | 第61-64页 |
| 3.3.4 差异表达基因分析 | 第64-65页 |
| 3.3.5 差异表达基因的GO分析 | 第65页 |
| 3.3.6 差异表达基因的功能和相关途径分析 | 第65-69页 |
| 3.3.7 qPCR验证转录组 | 第69-71页 |
| 3.3.8 生长素途径与激素测定 | 第71页 |
| 3.3.9 多胚候选区域内候选基因的表达水平 | 第71-72页 |
| 3.4 讨论 | 第72-75页 |
| 3.4.1 山金柑的无融合生殖特性 | 第73页 |
| 3.4.2 珠心胚发生中生长素信号途径被激活 | 第73-74页 |
| 3.4.3 CitRWP在山金柑和柑橘属单多胚胚珠中差异表达 | 第74-75页 |
| 第四章 柑橘无融合生殖候选基因CitRWP的功能分析和分子标记开发 | 第75-101页 |
| 4.1 引言 | 第75-76页 |
| 4.2 材料与方法 | 第76-84页 |
| 4.2.1 CitRWP基因的克隆与生物信息学分析 | 第76-77页 |
| 4.2.2 CitRWP基因表达分析 | 第77页 |
| 4.2.3 柑橘RWP-RK家族的进化分析 | 第77-78页 |
| 4.2.4 CitRWP亚细胞定位 | 第78-79页 |
| 4.2.5 CitRWP基因启动子克隆及元件分析 | 第79页 |
| 4.2.6 基于MITE标记的分子标记开发和验证 | 第79-80页 |
| 4.2.7 植物表达载体构建 | 第80-82页 |
| 4.2.8 农杆菌介导的拟南芥遗传转化 | 第82-84页 |
| 4.3 结果与分析 | 第84-98页 |
| 4.3.1 CitRWP基因结构特征分析 | 第84页 |
| 4.3.2 CitRWP基因表达分析 | 第84-88页 |
| 4.3.3 柑橘RWP家族的进化分析 | 第88页 |
| 4.3.4 CitRWP基因亚细胞定位分析 | 第88页 |
| 4.3.5 CitRWP基因启动子特征分析 | 第88-91页 |
| 4.3.6 MITE转座子在不同柑橘品种中的序列分析 | 第91-93页 |
| 4.3.7 基于MITE标记在分离群体和自然群体中的验证 | 第93-98页 |
| 4.3.8 植物表达载体构建和拟南芥转化 | 第98页 |
| 4.4 讨论 | 第98-101页 |
| 4.4.1 CitRWP可能是控制柑橘珠心胚发生的关键基因 | 第98-99页 |
| 4.4.2 MITE分子标记可用于鉴定柑橘属植物的单多胚性状 | 第99-100页 |
| 4.4.3 转座子活动可能是柑橘珠心胚现象的产生原因 | 第100-101页 |
| 第五章 总结和展望 | 第101-105页 |
| 参考文献 | 第105-120页 |
| 附录 | 第120-152页 |
| 附录1 本研究开发的SSR标记和InDel标记信息 | 第120-123页 |
| 附录2 山金柑PN2×DB杂交后代已结果植株的胚性 | 第123-134页 |
| 附录3 山金柑PN3×DB杂交后代已结果植株的胚性 | 第134-140页 |
| 附录4 HB柚×FC橘杂交后代已结果植株的胚性 | 第140-144页 |
| 附录5 红橘×枳壳杂交后代已结果植株的胚性 | 第144-146页 |
| 附录6 柑橘无融合生殖定位区段候选基因的注释 | 第146-149页 |
| 附录7 qPCR验证转录组数据有效性所用引物 | 第149-151页 |
| 附录8 攻读博士期间发表的论文 | 第151-152页 |
| 致谢 | 第152-154页 |
