| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 第一章 绪论 | 第10-17页 |
| 1.1 线粒体的介绍 | 第11-12页 |
| 1.1.1 线粒体起源学说 | 第11页 |
| 1.1.2 线粒体基因组的特点 | 第11-12页 |
| 1.2 线粒体翻译起始因子介绍 | 第12-13页 |
| 1.3 BN-PAGE在蛋白复合体研究中的应用 | 第13-14页 |
| 1.4 粟酒裂殖酵母作为模式生物的优点 | 第14-15页 |
| 1.5 本课题的研究内容与方法 | 第15-17页 |
| 1.5.1 本课题的研究内容 | 第15页 |
| 1.5.2 本课题的研究方法 | 第15页 |
| 1.5.3 本课题的创新之处与后续实验 | 第15-17页 |
| 第二章 粟酒裂殖酵母中Mti2,Mti3缺失后表型的研究 | 第17-38页 |
| 2.1 实验材料 | 第17-20页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第17页 |
| 2.1.2 所用试剂及耗材 | 第17页 |
| 2.1.3 培养基与试剂配制 | 第17-20页 |
| 2.1.3.1 培养基 | 第17-19页 |
| 2.1.3.2 试剂 | 第19-20页 |
| 2.1.4 仪器 | 第20页 |
| 2.2 实验方法 | 第20-28页 |
| 2.2.1 引物设计 | 第20页 |
| 2.2.2 制备大肠杆菌感受态细胞 | 第20-21页 |
| 2.2.3 mti2-hphMX6重组质粒的构建 | 第21-25页 |
| 2.2.4 利用醋酸锂转化方法将目的片段导入相应菌株中 | 第25-26页 |
| 2.2.5 提取粟酒裂殖酵母转化子基因组验证 | 第26-27页 |
| 2.2.6 点圈的方法 | 第27页 |
| 2.2.7 生长曲线的测定 | 第27页 |
| 2.2.8 Δmti2/mti2-flag回补实验 | 第27-28页 |
| 2.3 实验结果与分析 | 第28-36页 |
| 2.3.1 mti2-pFA6a-hphMX6重组质粒的酶切验证 | 第28-29页 |
| 2.3.2 重组片段的获得 | 第29-30页 |
| 2.3.3 粟酒裂殖酵母Δmti2菌株的验证 | 第30-31页 |
| 2.3.4 粟酒裂殖酵母Δmti2菌株的表型研究 | 第31-33页 |
| 2.3.5 yHL6381野生型菌株和Δmti2菌株生长曲线的测定 | 第33-34页 |
| 2.3.6 Amti2 /mti2-flag回补实验 | 第34-36页 |
| 2.4 讨论 | 第36-38页 |
| 第三章 芽殖酵母线粒体翻译起始因IFM1能回补救活Amti2菌株 | 第38-54页 |
| 3.1 实验材料 | 第38-40页 |
| 3.1.1 菌株 | 第38页 |
| 3.1.2 所用试剂和仪器 | 第38页 |
| 3.1.3 质粒 | 第38-39页 |
| 3.1.4 培养基及试剂配制 | 第39-40页 |
| 3.1.4.1 培养基 | 第39-40页 |
| 3.1.4.2 试剂 | 第40页 |
| 3.2 实验方法 | 第40-46页 |
| 3.2.1 引物设计 | 第40-41页 |
| 3.2.2 生物信息学分析 | 第41页 |
| 3.2.3 芽殖酵母基因组的提取 | 第41页 |
| 3.2.4 pREP4X系列质粒的构建 | 第41-44页 |
| 3.2.4.1 pREP4X-IFM1质粒的构建 | 第41-42页 |
| 3.2.4.2 pREP4X-mti2质粒的构建 | 第42-43页 |
| 3.2.4.3 pREP4X-IFM1-AMTS质粒的构建 | 第43-44页 |
| 3.2.5 pYJ19-IFMI重组质粒的构建 | 第44-45页 |
| 3.2.6 重组质粒经醋酸锂转入yHL6381和Anrf/2菌株中 | 第45-46页 |
| 3.2.7 荧光显微镜的观察 | 第46页 |
| 3.3 实验结果与分析 | 第46-52页 |
| 3.3.1 粟酒裂殖酵母Mti2同源性分析 | 第46-47页 |
| 3.3.1.1 Mti2与IFM1的同源性分析 | 第46页 |
| 3.3.1.2 IFM1定位于线粒体的信号肽(MTS)分析 | 第46-47页 |
| 3.3.2 pREP4X系列质粒构建结果 | 第47-49页 |
| 3.3.2.1 pRER4x-IFM1质粒构建结果与分析 | 第47-48页 |
| 3.3.2.2 pREP4X-mti2质粒构建与分析 | 第48-49页 |
| 3.3.2.3 pREP4X-IFM1-AMTS质粒构建结果与分析 | 第49页 |
| 3.3.3 pYJ19-IFM1质粒构建结果与分析 | 第49-50页 |
| 3.3.4 pREP4X系列回补实验点圈结果与分析 | 第50-51页 |
| 3.3.5 荧光显微镜观察结果 | 第51-52页 |
| 3.4 讨论 | 第52-54页 |
| 第四章 Mti2,Mti3蛋白的缺失对线粒体基因组编码的RNA水平影响的研究 | 第54-61页 |
| 4.1 实验材料 | 第54-55页 |
| 4.1.1 所用菌株 | 第54页 |
| 4.1.2 所用试剂盒 | 第54页 |
| 4.1.3 所用引物 | 第54-55页 |
| 4.2 实验方法 | 第55-57页 |
| 4.2.1 粟酒裂殖酵母Total RNA的提取 | 第55-56页 |
| 4.2.2 RNA的质量检测 | 第56页 |
| 4.2.3 cDNA模板的获得 | 第56-57页 |
| 4.2.4 实时荧光定量PCR | 第57页 |
| 4.3 实验结果 | 第57-59页 |
| 4.3.1 RNA的质量检测结果 | 第57-58页 |
| 4.3.2 qRT-PCR的检测结果 | 第58-59页 |
| 4.4 讨论 | 第59-61页 |
| 第五章 检测Δmti2及Δmti3菌株线粒体基因组水平变化 | 第61-66页 |
| 5.1 实验材料 | 第61页 |
| 5.1.1 所用菌株 | 第61页 |
| 5.1.2 所用试剂与耗材 | 第61页 |
| 5.1.3 培养基 | 第61页 |
| 5.1.4 试剂配制 | 第61页 |
| 5.1.5 仪器 | 第61页 |
| 5.2 实验方法 | 第61-63页 |
| 5.2.1 粟酒裂殖酵母基因组的提取 | 第61-62页 |
| 5.2.2 实时荧光定量PCR检测线粒体基因组拷贝数 | 第62-63页 |
| 5.3 实验结果与分析 | 第63-65页 |
| 5.3.1 Mti2,Mti3缺失后不同时期线粒体基因组拷贝数结果 | 第63-65页 |
| 5.4 讨论 | 第65-66页 |
| 第六章 BN-PAGE检测Mti2和Mti3蛋白的缺失对线粒体复合体及超复合体组装的影响 | 第66-77页 |
| 6.1 实验材料 | 第66-68页 |
| 6.1.1 所用菌株 | 第66页 |
| 6.1.2 所用试剂与耗材 | 第66-67页 |
| 6.1.3 仪器 | 第67页 |
| 6.1.4 所用培养基 | 第67页 |
| 6.1.5 BN-PAGE实验的试剂配制 | 第67页 |
| 6.1.6 粟酒裂殖酵母线粒体提取所用试剂 | 第67-68页 |
| 6.1.7 BN-PAGE电泳试剂配制 | 第68页 |
| 6.1.8 BN-PAGE梯度胶和浓缩胶配方 | 第68页 |
| 6.2 实验方法 | 第68-72页 |
| 6.2.1 BN-PAGE实验原理 | 第68-69页 |
| 6.2.2 粟酒裂殖酵母线粒体粗提取 | 第69-70页 |
| 6.2.3 BCA测定线粒体浓度 | 第70页 |
| 6.2.4 线粒体处理方法 | 第70-71页 |
| 6.2.5 BN-PAGE凝胶考染 | 第71页 |
| 6.2.6 BN-PAGE和Western blot步骤 | 第71-72页 |
| 6.3 结果与分析 | 第72-76页 |
| 6.3.0 粟酒裂殖酵母细胞壁酶解图 | 第72-73页 |
| 6.3.1 芽殖酵母考染与裂殖酵母考染结果 | 第73-74页 |
| 6.3.2 两种去垢剂处理线粒体BN-PAGE和Western blot结果与分析 | 第74-76页 |
| 6.4 讨论 | 第76-77页 |
| 全文总结 | 第77-78页 |
| 参考文献 | 第78-84页 |
| 附录一 菌种 | 第84-85页 |
| 附录二 实验仪器 | 第85-87页 |
| 在读期间发表的论文 | 第87-88页 |
| 致谢 | 第88页 |
