| 符号说明 | 第5-10页 |
| 中文摘要 | 第10-12页 |
| Abstract | 第12-14页 |
| 1 引言 | 第15-34页 |
| 1.1 生物质概述 | 第15-18页 |
| 1.1.1 纤维素 | 第15-17页 |
| 1.1.2 木质纤维素 | 第17-18页 |
| 1.2 生物质的酶降解 | 第18-20页 |
| 1.3 多糖单加氧酶研究进展 | 第20-31页 |
| 1.3.1 多糖单加氧酶概述 | 第20-23页 |
| 1.3.2 多糖单加氧酶结构 | 第23-25页 |
| 1.3.3 多糖单加氧酶作用机理 | 第25-26页 |
| 1.3.4 多糖单加氧酶的底物特异性 | 第26-27页 |
| 1.3.5 多糖单加氧酶的区域选择性 | 第27-29页 |
| 1.3.6 多糖单加氧酶研究方法 | 第29-31页 |
| 1.4 嗜热真菌概述 | 第31-33页 |
| 1.5 立题依据 | 第33-34页 |
| 2 材料与方法 | 第34-53页 |
| 2.1 试验材料 | 第34-37页 |
| 2.1.1 供试菌株与质粒 | 第34页 |
| 2.1.2 生化试剂、试剂盒、酶 | 第34页 |
| 2.1.3 仪器、层析板、色谱柱 | 第34-35页 |
| 2.1.4 溶液配制 | 第35-36页 |
| 2.1.5 培养基 | 第36-37页 |
| 2.1.6 酶促反应底物 | 第37页 |
| 2.2 实验方法 | 第37-53页 |
| 2.2.1 总RNA、cDNA的获取及Ctpmo1基因的获得 | 第37-39页 |
| 2.2.2 CtPMO1酶的真核表达 | 第39-46页 |
| 2.2.3 CtPMO1酶的N端鉴定 | 第46-48页 |
| 2.2.4 CtPMO1酶活性以及TLC鉴定 | 第48-49页 |
| 2.2.5 酶解产物的MALDI-TOF-MS鉴定 | 第49页 |
| 2.2.6 CtPMO1酶解产物的核磁共振谱 | 第49页 |
| 2.2.7 I_2氧化法分析CtPMO1酶解产物 | 第49-50页 |
| 2.2.8 Br_2氧化法分析CtPMO1酶解产物 | 第50页 |
| 2.2.9 还原法分析CtPMO1酶解产物 | 第50页 |
| 2.2.10 Br_2氧化法分析CtPMO1酶解反应不溶物 | 第50页 |
| 2.2.11 Br_2氧化法分析以纤维七糖为底物的CtPMO1酶解产物 | 第50-51页 |
| 2.2.12 CtPMO1酶的同源建模 | 第51页 |
| 2.2.13 CtPMO1酶的位点突变 | 第51-52页 |
| 2.2.14 CtPMO1酶突变酶的产物鉴定 | 第52页 |
| 2.2.15 PMO酶的序列比对以及系统发育树 | 第52-53页 |
| 3 结果与分析 | 第53-91页 |
| 3.1 总RNA、cDNA的获取及Ctpmo1基因的获得 | 第53-54页 |
| 3.2 CtPMO1酶的真核表达 | 第54-58页 |
| 3.3 CtPMO1酶的N端鉴定 | 第58-61页 |
| 3.3.1 CtPMO1酶的N端测序 | 第58-59页 |
| 3.3.2 CtPMO1酶的N端质谱鉴定 | 第59-61页 |
| 3.4 CtPMO1酶活性及可溶性产物分析 | 第61-71页 |
| 3.4.1 CtPMO1酶活性及可溶性产物的TLC分析 | 第61页 |
| 3.4.2 CtPMO1可溶性酶解产物的MALDI-TOF-MS鉴定 | 第61-67页 |
| 3.4.3 CtPMO1酶解产物的核磁共振谱 | 第67页 |
| 3.4.4 I_2氧化法分析CtPMO1酶解产物 | 第67-69页 |
| 3.4.5 Br_2氧化法分析CtPMO1酶解产物 | 第69-71页 |
| 3.4.6 还原法分析CtPMO1酶解产物 | 第71页 |
| 3.5 CtPMO1酶解反应不溶物成分分析 | 第71-73页 |
| 3.6 CtPMO1酶对纤维寡糖的氧化作用 | 第73-75页 |
| 3.7 CtPMO1酶的三维结构模型 | 第75-76页 |
| 3.8 底物结合平面芳香族氨基酸在CtPMO1酶活性中的作用 | 第76-84页 |
| 3.8.1 CtPMO1突变酶可溶性产物的TLC和MALDI-TOF-MS分析 | 第76-79页 |
| 3.8.2 CtPMO1突变酶可溶性产物的C4、C6位氧化分析 | 第79-81页 |
| 3.8.3 CtPMO1突变酶可溶性产物的HPACE-PAD分析 | 第81-82页 |
| 3.8.4 CtPMO1突变酶反应不溶物的碳位氧化分析 | 第82-84页 |
| 3.9 底物结合平面其他氨基酸在CtPMO1酶活性中作用的初步研究 | 第84-88页 |
| 3.9.1 活性中心氨基酸对CtPMO1酶活性影响的初步研究 | 第84-86页 |
| 3.9.2 Gln166位点对CtPMO1酶活性的影响的初步研究 | 第86-88页 |
| 3.10 C6氧化PMO酶的序列比对以及系统发育分析 | 第88-91页 |
| 4 讨论 | 第91-99页 |
| 4.1 I_2氧化鉴定方法的弊端 | 第91-92页 |
| 4.2 Br_2氧化方法的优势 | 第92-93页 |
| 4.3 CtPMO1酶C6氧化更易发生于可溶性寡糖 | 第93页 |
| 4.4 CtPMO1酶对底物氧化区域选择性的分子机理 | 第93-95页 |
| 4.5 CtPMO1酶具有C6氧化功能的机理尚未明确 | 第95-96页 |
| 4.6 C6氧化产物的去向 | 第96页 |
| 4.7 底物结合平面其他氨基酸对酶活性的影响 | 第96-97页 |
| 4.8 多糖单加酶分类 | 第97-98页 |
| 4.9 AA9家族蛋白的多样性 | 第98-99页 |
| 5 结论 | 第99-102页 |
| 5.1 CtPMO1酶的获得及碳位氧化区域选择性 | 第99-100页 |
| 5.2 CtPMO1酶可作用于可溶性纤维寡糖 | 第100页 |
| 5.3 底物结合位点影响CtPMO1酶的区域选择性 | 第100页 |
| 5.4 其他影响CtPMO1酶活性的位点 | 第100-101页 |
| 5.5 CtPMO1酶序列比对以及系统发育分析 | 第101-102页 |
| 参考文献 | 第102-119页 |
| 附录 | 第119-120页 |
| 致谢 | 第120-121页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第121页 |
