| 中文摘要 | 第10-13页 |
| Abstract | 第13-16页 |
| 1 前言 | 第17-37页 |
| 1.1 二穗短柄草研究现状 | 第17-20页 |
| 1.1.1 二穗短柄草的生物学特征 | 第17-18页 |
| 1.1.2 二穗短柄草基因组学研究进展 | 第18-20页 |
| 1.2 小麦分子生物学研究现状 | 第20-21页 |
| 1.2.1 小麦基因组学研究 | 第20页 |
| 1.2.2 小麦转基因技术 | 第20-21页 |
| 1.3 植物突变体库的构建方法及策略 | 第21-27页 |
| 1.3.1 理化诱变 | 第21-22页 |
| 1.3.2 T-DNA插入突变 | 第22-24页 |
| 1.3.3 转座子标签法 | 第24-26页 |
| 1.3.3.1 转座子概述 | 第24-25页 |
| 1.3.3.2 转座子标签法在建立突变体库的应用 | 第25-26页 |
| 1.3.4 逆转录转座子标签法 | 第26页 |
| 1.3.5 基因组编辑技术在构建突变体库的研究进展 | 第26-27页 |
| 1.4 Ac/Ds转座系统研究进展 | 第27-33页 |
| 1.4.1 Ac/Ds转座系统组成 | 第27-28页 |
| 1.4.2 Ac/Ds的转座行为与特点 | 第28页 |
| 1.4.2.1 Ac/Ds的转座机制 | 第28页 |
| 1.4.2.2 Ds转座特点 | 第28页 |
| 1.4.3 Ac/Ds转座系统在克隆功能基因的应用 | 第28-29页 |
| 1.4.4 影响Ac/Ds转座子跳跃的因素 | 第29-30页 |
| 1.4.4.1 Ac转座酶基因表达水平 | 第29页 |
| 1.4.4.2 Ds本身因素 | 第29-30页 |
| 1.4.5 Ac/Ds转座子割离与插入的检测方法 | 第30页 |
| 1.4.6 Ac/Ds系统所面临的挑战 | 第30-31页 |
| 1.4.7 Ac/Ds转座系统的改进 | 第31-33页 |
| 1.4.7.1 载体构建方式的改进 | 第31-32页 |
| 1.4.7.2 Ds元件的改进 | 第32-33页 |
| 1.5 转座子标签法克隆基因 | 第33-36页 |
| 1.5.1 基于Southern的分离法 | 第34页 |
| 1.5.2 基于PCR的分离方法 | 第34-36页 |
| 1.5.2.1 质粒挽救法 | 第34页 |
| 1.5.2.2 反向PCR | 第34-35页 |
| 1.5.2.3 接头PCR | 第35页 |
| 1.5.2.4 热不对称交错PCR | 第35-36页 |
| 1.6 本研究的目的和意义 | 第36-37页 |
| 2 材料与方法 | 第37-54页 |
| 2.1 材料 | 第37-39页 |
| 2.1.1 植物材料与生长条件 | 第37页 |
| 2.1.2 菌株和质粒 | 第37页 |
| 2.1.3 酶与生化试剂 | 第37页 |
| 2.1.4 引物 | 第37-39页 |
| 2.2 方法 | 第39-48页 |
| 2.2.1 植物表达载体构建 | 第39-43页 |
| 2.2.1.1 高保真酶PCR扩增 | 第39页 |
| 2.2.1.2 对PCR产物进行胶回收 | 第39-40页 |
| 2.2.1.3 TA克隆 | 第40页 |
| 2.2.1.4 大肠杆菌感受态的制备 | 第40-41页 |
| 2.2.1.5 大肠杆菌的转化 | 第41页 |
| 2.2.1.6 质粒提取 | 第41-42页 |
| 2.2.1.7 根癌农杆菌感受态细胞的制备 | 第42页 |
| 2.2.1.8 根癌农杆菌的转化 | 第42-43页 |
| 2.2.2 农杆菌介导的二穗短柄草遗传转化 | 第43-48页 |
| 2.2.2.1 愈伤的诱导 | 第43-44页 |
| 2.2.2.2 农杆菌侵染二穗短柄草愈伤 | 第44-45页 |
| 2.2.2.3 二穗短柄草的共培养 | 第45页 |
| 2.2.2.4 二穗短柄草的筛选 | 第45-47页 |
| 2.2.2.5 二穗短柄草的分化 | 第47页 |
| 2.2.2.6 二穗短柄草生根 | 第47-48页 |
| 2.2.2.7 二穗短柄草移栽 | 第48页 |
| 2.3 T0代转基因苗鉴定与分析 | 第48-50页 |
| 2.3.1 CTAB法提取基因组 | 第48页 |
| 2.3.2 PCR检测 | 第48-49页 |
| 2.3.3 GUS染色 | 第49-50页 |
| 2.4 边界分离 | 第50-51页 |
| 2.5 突变体分析 | 第51-54页 |
| 2.5.1 植物总RNA的提取 | 第51-52页 |
| 2.5.2 反转录 | 第52页 |
| 2.5.3 荧光定量 | 第52-53页 |
| 2.5.4 半定量 | 第53-54页 |
| 3 结果与分析 | 第54-75页 |
| 3.1 二穗短柄草的遗传转化 | 第54-56页 |
| 3.2 T0代转基因株系的鉴定与分析 | 第56页 |
| 3.3 T1代转基因株系的分析与非连锁转座植株的筛选 | 第56-60页 |
| 3.4 Ds元件边界序列与转座特点分析 | 第60-65页 |
| 3.4.1 Ds元件转座时间分析 | 第60-63页 |
| 3.4.2 Ds转座特点分析 | 第63页 |
| 3.4.3 Ds插入位点分析 | 第63-65页 |
| 3.5 检测Ds元件插入位置 | 第65-66页 |
| 3.6 突变体的富集 | 第66-71页 |
| 3.7 Ac/Ds转座子系统在小麦中的应用 | 第71-75页 |
| 3.7.1 转基因小麦的获得与分析鉴定 | 第71-73页 |
| 3.7.2 小麦仅Ds植株的筛选与鉴定 | 第73页 |
| 3.7.3 小麦仅Ds植株的定位 | 第73-75页 |
| 4 讨论 | 第75-78页 |
| 5 结论 | 第78-79页 |
| 参考文献 | 第79-91页 |
| 致谢 | 第91-92页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第92页 |
