| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第一章 绪论 | 第9-16页 |
| 1.1 蛋白酶简介 | 第9页 |
| 1.2 蛋白酶来源 | 第9页 |
| 1.3 蛋白酶克隆表达 | 第9-11页 |
| 1.3.1 大肠杆菌表达系统 | 第10页 |
| 1.3.2 芽孢杆菌表达系统 | 第10页 |
| 1.3.3 酵母表达系统 | 第10-11页 |
| 1.4 蛋白酶酶学性质 | 第11-13页 |
| 1.4.1 蛋白酶最适温度及温度稳定性 | 第11页 |
| 1.4.2 蛋白酶最适反应pH及pH稳定性 | 第11-12页 |
| 1.4.3 金属离子对蛋白酶活性的影响 | 第12页 |
| 1.4.4 化学试剂对蛋白酶活性的影响 | 第12-13页 |
| 1.5 蛋白酶的应用研究进展 | 第13-14页 |
| 1.5.1 蛋白酶在医药行业的应用 | 第13-14页 |
| 1.5.2 蛋白酶在其他行业的应用 | 第14页 |
| 1.6 生物活性肽简介 | 第14-15页 |
| 1.6.1 生物活性肽的研究进展 | 第14页 |
| 1.6.2 海参及海参多肽 | 第14-15页 |
| 1.7 本课题的意义和研究内容 | 第15-16页 |
| 1.7.1 本课题的意义 | 第15页 |
| 1.7.2 研究内容 | 第15-16页 |
| 第二章 材料与方法 | 第16-28页 |
| 2.1 实验材料 | 第16-18页 |
| 2.1.1 实验菌株和质粒 | 第16页 |
| 2.1.2 培养基 | 第16页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第16-17页 |
| 2.1.4 实验主要仪器与设备 | 第17-18页 |
| 2.2 实验方法 | 第18-28页 |
| 2.2.1 AprV大肠杆菌表达系统构建 | 第18-20页 |
| 2.2.2 AprV序列分析与同源建模 | 第20-21页 |
| 2.2.3 AprV蛋白酶表达条件优化 | 第21页 |
| 2.2.4 AprV蛋白纯化及酶学性质表征 | 第21-24页 |
| 2.2.5 AprV蛋白酶定向进化 | 第24-26页 |
| 2.2.6 AprV蛋白酶在海参多肽制备中的应用 | 第26-27页 |
| 2.2.7 AprV蛋白酶降解胶原蛋白 | 第27-28页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第28-50页 |
| 3.1 AprV重组表达与序列分析 | 第28-33页 |
| 3.1.1 AprV大肠杆菌表达体系构建 | 第28-29页 |
| 3.1.2 AprV蛋白酶序列分析 | 第29-31页 |
| 3.1.3 AprV蛋白酶同源模型构建 | 第31-33页 |
| 3.2 AprV蛋白酶表达条件优化 | 第33-36页 |
| 3.2.1 培养基种类对AprV表达的影响 | 第33-34页 |
| 3.2.2 IPTG浓度对AprV表达的影响 | 第34页 |
| 3.2.3 诱导时间对AprV表达的影响 | 第34-35页 |
| 3.2.4 IPTG添加时机对AprV表达的影响 | 第35页 |
| 3.2.5 温度对AprV表达的影响 | 第35-36页 |
| 3.3 AprV蛋白纯化及酶学性质表征 | 第36-42页 |
| 3.3.1 AprV蛋白表达纯化 | 第36-37页 |
| 3.3.2 AprV酶学性质研究 | 第37-42页 |
| 3.4 AprV蛋白酶定向进化 | 第42-44页 |
| 3.4.1 定点突变重组菌构建 | 第42-43页 |
| 3.4.2 突变体的活性测定 | 第43-44页 |
| 3.5 AprV蛋白酶在海参多肽制备中的应用 | 第44-47页 |
| 3.5.1 酶解产物形态观察 | 第44-45页 |
| 3.5.2 可溶性蛋白浓度及SDS-PAGE检测多肽 | 第45页 |
| 3.5.3 游离氨基酸分析及多肽分析 | 第45-46页 |
| 3.5.4 总氮、氨基氮含量测定及水解度分析 | 第46-47页 |
| 3.5.5 残渣回收分析 | 第47页 |
| 3.6 AprV蛋白酶降解胶原蛋白 | 第47-50页 |
| 3.6.1 胶原蛋白简介 | 第47页 |
| 3.6.2 胶原蛋白酶解 | 第47-50页 |
| 主要结论与展望 | 第50-52页 |
| 主要结论 | 第50页 |
| 展望 | 第50-52页 |
| 致谢 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-58页 |
| 附录：作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第58页 |