| 摘要 | 第5-7页 |
| abstract | 第7-8页 |
| 第一章 绪论 | 第12-18页 |
| 1.1 IL-6家族及其受体概述 | 第12-13页 |
| 1.2 STAT3概述 | 第13页 |
| 1.3 IL-6/STAT3信号通路 | 第13-14页 |
| 1.4 IL-6与炎症相关因子 | 第14-15页 |
| 1.5 IL-10概述 | 第15-16页 |
| 1.6 硬骨鱼IL-6的研究进展 | 第16页 |
| 1.7 本论文的研究内容与意义 | 第16-18页 |
| 第二章 重组草鱼IL-6蛋白的诱导表达纯化及活性验证 | 第18-32页 |
| 2.1 实验动物与细胞系 | 第18页 |
| 2.2 实验材料与方法 | 第18-25页 |
| 2.2.1 草鱼IL-6原核表达载体的信息 | 第18-19页 |
| 2.2.2 重组草鱼IL-6蛋白的原核诱导表达与纯化 | 第19-20页 |
| 2.2.2.1 草鱼重组IL-6蛋白的原核诱导表达 | 第19-20页 |
| 2.2.2.2 重组草鱼IL-6蛋白的纯化 | 第20页 |
| 2.2.3 蛋白浓度的测定 | 第20-21页 |
| 2.2.4 聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第21页 |
| 2.2.5 免疫印迹法(WesternBlot,WB) | 第21-23页 |
| 2.2.6 草鱼头肾白细胞的分离与培养 | 第23页 |
| 2.2.7 重组草鱼IL-6蛋白加药处理草鱼头肾白细胞 | 第23页 |
| 2.2.8 RNA的提取 | 第23-24页 |
| 2.2.9 cDNA模板的制备 | 第24页 |
| 2.2.10 荧光定量PCR | 第24-25页 |
| 2.3 统计与分析 | 第25-26页 |
| 2.4 实验结果 | 第26-30页 |
| 2.4.1 原核表达草鱼IL-6蛋白的纯化 | 第26-27页 |
| 2.4.2 重组草鱼IL-6蛋白(rgcIl-6)的活性鉴定 | 第27-30页 |
| 2.4.2.1 重组草鱼IL-6蛋白上调HKL中SOCS3mRNA的表达水平 | 第27-28页 |
| 2.4.2.2 重组草鱼IL-6蛋白上调HKL中STAT3剪接异构体mRNA的表达水平 | 第28-29页 |
| 2.4.2.3 重组草鱼IL-6蛋白上调CIK中SOCS3mRNA的表达水平 | 第29-30页 |
| 2.5 讨论与分析 | 第30-31页 |
| 2.6 本章小结 | 第31-32页 |
| 第三章 重组草鱼IL-6蛋白诱导HKL中促炎因子基因的表达 | 第32-41页 |
| 3.1 实验动物与细胞 | 第32页 |
| 3.2 实验方法与操作 | 第32页 |
| 3.3 实验结果 | 第32-38页 |
| 3.3.1 重组草鱼IL-6蛋白诱导HKL中促炎因子基因的表达 | 第32-35页 |
| 3.3.2 STAT3信号通路参与了草鱼IL-6对促炎因子基因表达的调控 | 第35-36页 |
| 3.3.2.1 重组草鱼IL-6蛋白可以激活HKL中STAT3的磷酸化 | 第35-36页 |
| 3.3.2.2 STAT3抑制剂抑制草鱼IL-6蛋白诱导的促炎因子mRNA的表达水平 | 第36页 |
| 3.3.3 MAPK抑制剂对重组草鱼IL-6蛋白诱导HKL中促炎因子基因表达的影响 | 第36-38页 |
| 3.4 讨论与分析 | 第38-40页 |
| 3.5 本章小结 | 第40-41页 |
| 第四章 重组草鱼IL-6蛋白对HKL中IL-10基因表达的调控 | 第41-53页 |
| 4.1 实验动物与细胞 | 第41页 |
| 4.2 实验方法与操作 | 第41-43页 |
| 4.2.1 重组草鱼IL-6蛋白处理HKL及IL-10mRNA表达水平的检测 | 第41页 |
| 4.2.2 酶联免疫吸附实验(ELISA) | 第41-42页 |
| 4.2.3 CIK细胞的转染 | 第42页 |
| 4.2.4 启动子活性的检测 | 第42-43页 |
| 4.2.5 定点突变质粒的构建 | 第43页 |
| 4.3 实验结果 | 第43-50页 |
| 4.3.1 草鱼IL-6蛋白调节抑炎因子IL-10基因的表达 | 第43-45页 |
| 4.3.2 草鱼IL-6刺激HKL分泌IL-10蛋白 | 第45页 |
| 4.3.3 STAT3信号通路参与了重组草鱼IL-6蛋白对IL-10基因表达的调控 | 第45-46页 |
| 4.3.4 MAPK信号通路不影响重组草鱼IL-6蛋白对IL-10基因表达的调控 | 第46-47页 |
| 4.3.5 重组草鱼IL-6蛋白不影响IL-10mRNA的稳定性 | 第47-48页 |
| 4.3.6 重组草鱼IL-6蛋白上调IL-10基因启动子的活性 | 第48页 |
| 4.3.7 STAT3α的持续性激活可以调控IL-10基因启动子的活性 | 第48-50页 |
| 4.3.7.1 STAT3α1和STAT3α2持续性激活质粒的构建 | 第48-49页 |
| 4.3.7.2 STAT3α的持续性激活可以调控IL-10基因启动子的活性 | 第49-50页 |
| 4.4 讨论分析 | 第50-52页 |
| 4.5 本章小结 | 第52-53页 |
| 第五章 全文总结与展望 | 第53-55页 |
| 5.1 全文总结 | 第53页 |
| 5.2 后续工作展望 | 第53-55页 |
| 致谢 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-64页 |
| 攻读硕士学位期间取得的成果 | 第64页 |
