| 摘要 | 第10-12页 |
| 英文摘要 | 第12-13页 |
| 1 引言 | 第14-29页 |
| 1.1 细胞自噬的概述 | 第14-15页 |
| 1.1.1 细胞自噬的基本概念及发生 | 第14-15页 |
| 1.1.2 细胞自噬相关基因编码的蛋白质 | 第15页 |
| 1.2 细胞自噬的研究方法 | 第15-23页 |
| 1.2.1 细胞自噬的抑制和诱导 | 第15-17页 |
| 1.2.2 基于电镜技术的方法 | 第17-18页 |
| 1.2.3 基于免疫荧光技术的方法 | 第18-19页 |
| 1.2.4 基于Western blot技术的方法 | 第19-21页 |
| 1.2.5 基于流式细胞术的方法 | 第21-22页 |
| 1.2.6 自噬活性的直接检测方法 | 第22-23页 |
| 1.3 冠状病毒感染与自噬的关系 | 第23-26页 |
| 1.3.1 alpha-CoV与自噬 | 第23-24页 |
| 1.3.2 beta-CoV与自噬 | 第24-25页 |
| 1.3.3 gamma-CoV病毒与自噬 | 第25-26页 |
| 1.4 冠状病毒感染后细胞超微结构变化 | 第26页 |
| 1.5 PEDV的基本介绍 | 第26-27页 |
| 1.5.1 PEDV的结构 | 第27页 |
| 1.5.2 PEDV的流行病学分布 | 第27页 |
| 1.6 研究目的与意义 | 第27-29页 |
| 2 材料与方法 | 第29-46页 |
| 2.1 实验材料 | 第29-31页 |
| 2.1.1 细胞系及病毒毒株 | 第29页 |
| 2.1.2 免疫标记抗原 | 第29页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第29-30页 |
| 2.1.4 主要仪器 | 第30-31页 |
| 2.1.5 主要分析软件 | 第31页 |
| 2.2 实验方法 | 第31-46页 |
| 2.2.1 自噬调控后细胞的电镜检测 | 第31-34页 |
| 2.2.2 自噬调控后对细胞降解功能的影响检测 | 第34-35页 |
| 2.2.3 CQ对内体溶酶体的影响检测 | 第35-37页 |
| 2.2.4 CQ与自噬的关系 | 第37-40页 |
| 2.2.5 PEDV感染与自噬的关系 | 第40页 |
| 2.2.6 PEDV感染诱导产生的多种细胞内超微结构分析 | 第40页 |
| 2.2.7 PEDV在细胞内生活周期的监测 | 第40-43页 |
| 2.2.8 PEDV诱导细胞内超微结构的定量分析 | 第43页 |
| 2.2.9 PEDV感染后高尔基体相关结构变化分析 | 第43-44页 |
| 2.2.10 PEDV感染后内质网相关结构变化 | 第44-45页 |
| 2.2.11 PEDV感染后内体-溶酶体系统相关结构变化 | 第45-46页 |
| 3 结果 | 第46-77页 |
| 3.1 自噬调控后细胞的电镜检测 | 第46-50页 |
| 3.1.1 自噬调控后细胞的常规电镜检测 | 第46-50页 |
| 3.1.2 自噬调控后的免疫电镜检测 | 第50页 |
| 3.2 自噬药物对细胞降解的荧光检测 | 第50-53页 |
| 3.3 CQ对内体-溶酶体的影响检测 | 第53-57页 |
| 3.3.1 内体-溶酶体相关标签的荧光变化 | 第53-56页 |
| 3.3.2 BSA摄取实验分析 | 第56-57页 |
| 3.4 CQ与自噬关系 | 第57-60页 |
| 3.4.1 自噬潮的Western blot检测 | 第57页 |
| 3.4.2 自噬潮的长寿蛋白降解实验 | 第57-58页 |
| 3.4.3 自噬潮的LDH合实验 | 第58页 |
| 3.4.4 自噬潮的mRFP-GFP-LC3报告蛋白检测 | 第58-60页 |
| 3.5 PEDV感染与自噬的关系 | 第60页 |
| 3.6 PEDV感染诱导产生的多种细胞内超微结构分析 | 第60-63页 |
| 3.6.1 细胞内膜结构重组变化 | 第61页 |
| 3.6.2 病毒粒子相关结构 | 第61-63页 |
| 3.7 PEDV在细胞内生活周期的监测 | 第63-65页 |
| 3.7.1 PEDV在Vero细胞上复制情况的监测 | 第63-64页 |
| 3.7.2 PEDV感染细胞后病毒相关mRNA水平变化研究 | 第64-65页 |
| 3.7.3 PEDV感染细胞后感染性病毒粒子释放的监测 | 第65页 |
| 3.8 PEDV感染诱导超微结构的定量分析 | 第65-68页 |
| 3.8.1 病毒感染曲线的电镜结果定量分析 | 第65-66页 |
| 3.8.2 细胞内膜结构重组变化定量分析 | 第66-67页 |
| 3.8.3 病毒粒子相关结构定量分析 | 第67-68页 |
| 3.9 PEDV感染后高尔基体相关结构变化分析 | 第68-71页 |
| 3.9.1 感染后高尔基体相关结构分析 | 第68-69页 |
| 3.9.2 高尔基体标记蛋白在PEDV感染后的荧光形态变化 | 第69-71页 |
| 3.9.3 高尔基体标记蛋白在PEDV感染后的超微结构定位分析 | 第71页 |
| 3.10 PEDV感染后内质网相关结构变化分析 | 第71-75页 |
| 3.10.1 感染早期内质网相关结构定性分析 | 第71-72页 |
| 3.10.2 感染后期内质网相关结构定量分析 | 第72-73页 |
| 3.10.3 内质网标记蛋白的荧光变化 | 第73页 |
| 3.10.4 内质网标记蛋白的超微结构定位 | 第73-75页 |
| 3.11 PEDV感染后内体-溶酶体系统相关结构变化分析 | 第75-77页 |
| 3.11.1 内体-溶酶体标记蛋白的荧光追踪 | 第75-76页 |
| 3.11.2 内体-溶酶体标记蛋白的超微结构定位 | 第76-77页 |
| 4 讨论 | 第77-83页 |
| 4.1 溶酶体示踪剂的使用注意事项 | 第77页 |
| 4.2 CQ与其他药物对自噬影响的差异分析 | 第77-78页 |
| 4.3 CQ与自噬之间关系 | 第78-79页 |
| 4.3.1 CQ诱导高尔基体变化参与自噬过程 | 第78页 |
| 4.3.2 CQ初期诱导的细胞自噬 | 第78-79页 |
| 4.4 CQ的非自噬作用 | 第79页 |
| 4.4.1 CQ作为自噬抑制剂时的其他作用 | 第79页 |
| 4.4.2 关于CQ诱导产生的液泡样结构分析 | 第79页 |
| 4.5 PEDV与自噬关系分析 | 第79-80页 |
| 4.6 PEDV感染后超微结构的分析 | 第80-82页 |
| 4.6.1 首次发现alpha-CoV诱导的CM | 第80页 |
| 4.6.2 PEDV感染引起细胞内质网增殖 | 第80页 |
| 4.6.3 PEDV感染诱导ERB | 第80-81页 |
| 4.6.4 PEDV感染诱导IVC | 第81页 |
| 4.6.5 PEDV病毒粒子的分布及形态 | 第81-82页 |
| 4.7 研究结果对PEDV实际应用意义 | 第82-83页 |
| 5 结论 | 第83-84页 |
| 致谢 | 第84-85页 |
| 参考文献 | 第85-102页 |
| 攻读博士学位期间发表的学术论文 | 第102页 |
