| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 1 前言 | 第12-35页 |
| 1.1 苏云金芽胞杆菌 | 第12-13页 |
| 1.2 营养期杀虫蛋白 | 第13-30页 |
| 1.2.1 Vip1A/Vip2A蛋白 | 第16-20页 |
| 1.2.2 Vip3Aa蛋白 | 第20-26页 |
| 1.2.3 作用模式 | 第26-28页 |
| 1.2.4 Vip蛋白的应用 | 第28-30页 |
| 1.2.5 Vip蛋白及转vip基因植物的安全性 | 第30页 |
| 1.3 苏云金芽胞杆菌Vip蛋白关键位点研究方法 | 第30-33页 |
| 1.3.1 定点突变 | 第30-32页 |
| 1.3.2 随机突变 | 第32-33页 |
| 1.4 研究的目的和意义 | 第33页 |
| 1.5 实验技术路线 | 第33-35页 |
| 2 材料与方法 | 第35-52页 |
| 2.1 Vip3Aa11定点突变 | 第35-42页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第35-37页 |
| 2.1.2 实验方法 | 第37-42页 |
| 2.2 cry1Ac启动子表达Vip3Aa11载体构建 | 第42-48页 |
| 2.2.1 实验材料 | 第42-44页 |
| 2.2.2 实验方法 | 第44-48页 |
| 2.3 Vip3Aa11随机突变 | 第48-52页 |
| 2.3.1 实验材料 | 第48-49页 |
| 2.3.2 实验方法 | 第49-52页 |
| 3 结果与分析 | 第52-79页 |
| 3.1 Vip3Aa11定点突变 | 第52-65页 |
| 3.1.1 Vip3Aa11 N端区定点突变 | 第52-58页 |
| 3.1.2 Vip3Aa11 C端活性区定点突变 | 第58-65页 |
| 3.2 cry1Ac启动子表达Vip3Aa11载体构建 | 第65-69页 |
| 3.2.1 重叠引物PCR | 第65-67页 |
| 3.2.2 蛋白表达分析 | 第67页 |
| 3.2.3 生物活性测定 | 第67-68页 |
| 3.2.4 抗胰蛋白酶稳定性分析 | 第68页 |
| 3.2.5 发酵条件优化 | 第68-69页 |
| 3.3 Vip3Aa11随机突变 | 第69-79页 |
| 3.3.1 随机突变文库建立流程 | 第69-70页 |
| 3.3.2 易错PCR条件的确定 | 第70-72页 |
| 3.3.3 随机突变库的建立 | 第72页 |
| 3.3.4 随机突变库序列分析 | 第72-75页 |
| 3.3.5 随机突变库生物活性筛选 | 第75-79页 |
| 4 讨论 | 第79-83页 |
| 4.1 定点突变 | 第79-80页 |
| 4.2 pAc启动子载体的构建 | 第80-81页 |
| 4.3 随机突变 | 第81-83页 |
| 5 结论与展望 | 第83-85页 |
| 5.1 结论 | 第83页 |
| 5.2 创新点 | 第83页 |
| 5.3 展望 | 第83-85页 |
| 致谢 | 第85-86页 |
| 参考文献 | 第86-97页 |
| 攻读博士学位期间发表的学术论文 | 第97页 |