| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 第1章 绪论 | 第9-15页 |
| 1.1 SHP2的分子结构特点 | 第9-10页 |
| 1.2 SHP2在信号通路中的作用 | 第10-11页 |
| 1.3 SHP2与疾病的关系 | 第11-12页 |
| 1.3.1 Noonan综合征 | 第11-12页 |
| 1.3.2 白血病 | 第12页 |
| 1.4 SHP2与癌症的关系 | 第12-13页 |
| 1.4.1 黑色素瘤 | 第12-13页 |
| 1.4.2 乳腺癌 | 第13页 |
| 1.4.3 肝癌 | 第13页 |
| 1.5 小结 | 第13-15页 |
| 第2章 七鳃鳗Lja-SHP2的分子克隆及生物信息学分析 | 第15-35页 |
| 2.1 七鳃鳗Lja-SHP2的分子克隆 | 第15-22页 |
| 2.1.1 材料 | 第15页 |
| 2.1.2 方法 | 第15-19页 |
| 2.1.3 结果 | 第19-22页 |
| 2.2 七鳃鳗Lja-SHP2基因序列生物信息学分析 | 第22-34页 |
| 2.2.1 软件、在线网站和数据库 | 第22-23页 |
| 2.2.2 结果 | 第23-34页 |
| 2.3 讨论 | 第34页 |
| 2.4 小结 | 第34-35页 |
| 第3章 七鳃鳗Lja-SHP2分子的原核重组表达与蛋白纯化 | 第35-51页 |
| 3.1 材料 | 第35页 |
| 3.2 方法 | 第35-44页 |
| 3.2.1 引物设计 | 第35-36页 |
| 3.2.2 Lja-SHP2和pET-32a(+)的质粒提取 | 第36-37页 |
| 3.2.3 Lja-SHP2质粒PCR扩增及回收 | 第37-39页 |
| 3.2.4 目的片段Lja-SHP2与表达载体pET-32a(+)双酶切 | 第39-40页 |
| 3.2.5 目的片段Lja-SHP2与表达载体pET-32a(+)的回收 | 第40页 |
| 3.2.6 目的片段Lja-SHP2与表达载体pET-32a(+)连接与转化 | 第40页 |
| 3.2.7 重组表达菌的鉴定 | 第40页 |
| 3.2.8 蛋白的诱导 | 第40-41页 |
| 3.2.9 可溶性蛋白鉴定 | 第41页 |
| 3.2.10 目的蛋白纯化 | 第41-43页 |
| 3.2.11 蛋白浓度的测定 | 第43-44页 |
| 3.3 结果 | 第44-49页 |
| 3.4 讨论 | 第49-50页 |
| 3.5 小结 | 第50-51页 |
| 第4章 七鳃鳗Lja-SHP2重组蛋白多克隆抗体制备及其鉴定 | 第51-56页 |
| 4.1 材料 | 第51页 |
| 4.2 方法 | 第51-54页 |
| 4.2.1 免疫方法 | 第51-52页 |
| 4.2.2 免疫印迹法检测Lja-SHP2多克隆抗体的效价 | 第52-53页 |
| 4.2.3 Lja-SHP2多克隆抗体的纯化 | 第53-54页 |
| 4.3 结果 | 第54-55页 |
| 4.3.1 Lja-SHP2多克隆抗体的效价 | 第54页 |
| 4.3.2 检测Lja-SHP2多克隆抗体的特异性 | 第54-55页 |
| 4.4 讨论 | 第55页 |
| 4.5 小结 | 第55-56页 |
| 第5章 Lja-SHP2基因在七鳃鳗免疫应答过程中的表达模式及siRNA干扰实验 | 第56-65页 |
| 5.1 材料 | 第56页 |
| 5.2 方法 | 第56-59页 |
| 5.2.1 七鳃鳗的免疫处理 | 第56页 |
| 5.2.2 七鳃鳗的单个核白细胞的提取及各组织提取 | 第56-57页 |
| 5.2.3 七鳃鳗的组织RNA和单个核白细胞的RNA的提取方法 | 第57页 |
| 5.2.4 PCR法检测七鳃鳗Lja-SHP2基因的表达 | 第57-58页 |
| 5.2.5 Lja-SHP2的RNA干扰敲减 | 第58页 |
| 5.2.6 Lja-SHP2的siRNA干扰效果在mRNA水平进行检验 | 第58页 |
| 5.2.7 免疫印迹法检测七鳃鳗Lja-SHP2基因的表达 | 第58-59页 |
| 5.3 结果 | 第59-64页 |
| 5.3.1 Lja-SHP2的mRNA在七鳃鳗免疫相关组织中的表达特点 | 第59-60页 |
| 5.3.2 Westernblot检测Lja-SHP2蛋白在免疫相关组织中的表达模式 | 第60-61页 |
| 5.3.3 Lja-SHP2基因mRNA的siRNA敲减检测 | 第61-64页 |
| 5.4 讨论 | 第64页 |
| 5.5 小结 | 第64-65页 |
| 结论 | 第65-66页 |
| 本文创新点 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-72页 |
| 附录1 不同物种SHP1和SHP2的FASTA格式氨基酸序列 | 第72-88页 |
| 附录2 pET-32a(+)序列图谱 | 第88-89页 |
| 附录3 Lja-SHP2重组蛋白质谱结果 | 第89-90页 |
| 附录4 重组蛋白纯化后的蛋白浓度曲线 | 第90-91页 |
| 附录5 抗体纯化后的抗体浓度曲线 | 第91-92页 |
| 致谢 | 第92页 |
