| 摘要 | 第4-9页 |
| Abstract | 第9-14页 |
| 英文缩略语 | 第15-20页 |
| 第一部分 17β-雌二醇及GPR30干预ATDC5软骨细胞线粒体自噬的研究 | 第20-39页 |
| 1 前言 | 第20-22页 |
| 2 材料与方法 | 第22-32页 |
| 2.1 实验材料 | 第22-25页 |
| 2.1.1 细胞 | 第22页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第22-23页 |
| 2.1.3 主要实验仪器 | 第23-24页 |
| 2.1.4 主要试剂配制 | 第24-25页 |
| 2.2 实验方法 | 第25-32页 |
| 2.2.1 细胞培养 | 第25页 |
| 2.2.2 Real-timePCR技术检测ATDC5细胞中GPR30mRNA的表达 | 第25-28页 |
| 2.2.3 Westernblot检测ATDC5细胞中GPR30蛋白的表达情况 | 第28-30页 |
| 2.2.4 免疫荧光染色观察ATDC5细胞中GPR30蛋白分布 | 第30页 |
| 2.2.5 透射电子显微镜观察17β-雌二醇对ATDC5细胞线粒体中自噬体形成的影响 | 第30-31页 |
| 2.2.6 免疫荧光双染法观察17β-雌二醇对ATDC5细胞中自噬溶酶体数量变化的影响 | 第31页 |
| 2.2.7 统计学分析 | 第31-32页 |
| 3 结果 | 第32-36页 |
| 3.1 17β-雌二醇上调ATDC5细胞中GPR30mRNA水平 | 第32页 |
| 3.2 17β-雌二醇促进ATDC5细胞中GPR30蛋白的表达 | 第32-33页 |
| 3.3 免疫荧光染色观察到17β-雌二醇促进ATDC5细胞质中GPR30蛋白的表达 | 第33-34页 |
| 3.4 透射电子显微镜下观察到17β-雌二醇抑制ATDC5细胞线粒体中自噬体的形成 | 第34页 |
| 3.5 免疫荧光双染法观察到17β-雌二醇减少ATDC5细胞质中自噬溶酶体的数量 | 第34-36页 |
| 4 讨论 | 第36-38页 |
| 5 结论 | 第38-39页 |
| 第二部分 17β-雌二醇通过GPR30影响ATDC5软骨细胞线粒体自噬相关蛋白活性的研究 | 第39-51页 |
| 1 前言 | 第39-40页 |
| 2 材料与方法 | 第40-45页 |
| 2.1 实验材料 | 第40-42页 |
| 2.1.1 细胞 | 第40页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第40-41页 |
| 2.1.3 主要实验仪器 | 第41页 |
| 2.1.4 主要试剂配制 | 第41-42页 |
| 2.2 实验方法 | 第42-45页 |
| 2.2.1 细胞培养 | 第42页 |
| 2.2.2 17β-雌二醇及GPR30对ATDC5细胞自噬相关蛋白LC3、TOM20和Hsp60活性的影响 | 第42-44页 |
| 2.2.3 统计学分析 | 第44-45页 |
| 3 结果 | 第45-48页 |
| 3.1 17β-雌二醇及GPR30通过PI3K途径降低ATDC5细胞自噬相关蛋白LC3-II的活性 | 第45页 |
| 3.2 17β-雌二醇及GPR30通过PI3K途径使ATDC5细胞线粒体自噬相关蛋白TOM20和Hsp60的活性升高 | 第45-48页 |
| 3.2.1 17β-雌二醇通过GPR30提高ATDC5细胞TOM20的蛋白活性 | 第45-46页 |
| 3.2.2 17β-雌二醇通过GPR30提高ATDC5细胞Hsp60的蛋白活性 | 第46-48页 |
| 4 讨论 | 第48-50页 |
| 5 结论 | 第50-51页 |
| 第三部分 17β-雌二醇调节ATDC5软骨细胞线粒体自噬的分子机制研究 | 第51-67页 |
| 1 前言 | 第51-52页 |
| 2 材料与方法 | 第52-60页 |
| 2.1 实验材料 | 第52-54页 |
| 2.1.1 细胞 | 第52页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第52-53页 |
| 2.1.3 主要实验仪器 | 第53页 |
| 2.1.4 主要试剂配制 | 第53-54页 |
| 2.2 实验方法 | 第54-60页 |
| 2.2.1 细胞培养 | 第54页 |
| 2.2.2 Westernblot检测17β-雌二醇对ATDC5细胞中Akt和mTOR蛋白活性的影响 | 第54-56页 |
| 2.2.3 Westernblot检测17β-雌二醇对ATDC5细胞中p38蛋白活性的影响 | 第56-57页 |
| 2.2.4 Westernblot检测17β-雌二醇对ATDC5细胞中JNK蛋白活性的影响 | 第57-59页 |
| 2.2.5 统计学分析 | 第59-60页 |
| 3 结果 | 第60-64页 |
| 3.1 17β-雌二醇通过PI3K-Akt-mTOR途径调节ATDC5细胞线粒体自噬 | 第60-61页 |
| 3.2 17β-雌二醇未通过p38途径调节ATDC5细胞线粒体自噬 | 第61-62页 |
| 3.3 17β-雌二醇未通过JNK途径调节ATDC5细胞线粒体自噬 | 第62-64页 |
| 4 讨论 | 第64-66页 |
| 5 结论 | 第66-67页 |
| 本研究创新性的自我评价 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-74页 |
| 综述 | 第74-86页 |
| 参考文献 | 第79-86页 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 | 第86-87页 |
| 致谢 | 第87-88页 |
| 个人简介 | 第88页 |
