| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 英文缩略词表 | 第9-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-26页 |
| 1 CDV概述 | 第13-15页 |
| 1.1 CD疾病简介 | 第13页 |
| 1.2 CDV形态结构 | 第13-14页 |
| 1.3 CDV基因组结构 | 第14-15页 |
| 2 CDV血凝蛋白基因 | 第15-18页 |
| 2.1 血凝蛋白的功能 | 第15-16页 |
| 2.2 血凝蛋白的高变异率 | 第16-17页 |
| 2.3 基于血凝蛋白基因的CDV流行情况 | 第17-18页 |
| 3 CDV检测方法研究进展 | 第18-25页 |
| 3.1 病毒的分离培养 | 第18页 |
| 3.2 电镜诊断 | 第18-19页 |
| 3.3 免疫学检查 | 第19-20页 |
| 3.3.1 免疫组化技术 | 第19页 |
| 3.3.2 免疫荧光技术 | 第19页 |
| 3.3.3 酶联免疫吸附试验 | 第19-20页 |
| 3.3.4 胶体金技术 | 第20页 |
| 3.4 分子生物学诊断 | 第20-23页 |
| 3.4.1 核酸杂交技术 | 第20-21页 |
| 3.4.2 聚合酶链式反应 | 第21页 |
| 3.4.3 实时荧光定量PCR | 第21-23页 |
| 3.4.4 环介导等温扩增技术 | 第23页 |
| 3.5 CDV野毒株和疫苗株鉴别方法进展 | 第23-25页 |
| 4 本研究的目的及意义 | 第25-26页 |
| 第二章 SYBR GreenIreal-time PCR检测CDV野毒株方法的建立和应用 | 第26-43页 |
| 1 材料 | 第26-27页 |
| 1.1 试验试剂 | 第26页 |
| 1.2 试验仪器与设备 | 第26-27页 |
| 1.3 试验疫苗和毒株 | 第27页 |
| 2 方法 | 第27-34页 |
| 2.1 引物设计 | 第27-28页 |
| 2.2 SYBR GreenIreal-time PCR检测CDV野毒株方法的建立 | 第28-34页 |
| 2.2.1 CDV野毒株RNA的提取 | 第28页 |
| 2.2.2 PCR检测CDV野毒株 | 第28-29页 |
| 2.2.3 制备CDV野毒株标准质粒 | 第29-33页 |
| 2.2.4 real-time PCR反应条件的优化 | 第33页 |
| 2.2.5 real-time PCR标准曲线的建立 | 第33页 |
| 2.2.6 real-time PCR特异性、灵敏度、重复性检测 | 第33-34页 |
| 2.2.7 SYBR GreenIreal-time PCR检测CDV野毒株方法的临床应用 | 第34页 |
| 3 结果 | 第34-40页 |
| 3.1 CDV野毒株的标准质粒构建 | 第34-35页 |
| 3.2 real-time PCR退火温度和引物浓度优化结果 | 第35-36页 |
| 3.3 real-time PCR标准曲线的建立 | 第36-37页 |
| 3.4 real-time PCR特异性试验结果 | 第37-38页 |
| 3.5 real-time PCR敏感性试验结果 | 第38-39页 |
| 3.6 real-time PCR重复性试验结果 | 第39-40页 |
| 3.7 SYBR GreenIreal-time PCR检测CDV野毒株方法的临床应用结果 | 第40页 |
| 4 讨论 | 第40-43页 |
| 第三章 四川CDV流行毒株的遗传变异分析 | 第43-59页 |
| 1 材料 | 第43-44页 |
| 1.1 样品 | 第43页 |
| 1.2 试验试剂 | 第43-44页 |
| 2 方法 | 第44-46页 |
| 2.1 引物合成 | 第44页 |
| 2.2 样品RNA提取和反转录 | 第44页 |
| 2.3 CDV H全基因PCR扩增 | 第44页 |
| 2.4 DNA产物纯化 | 第44-45页 |
| 2.5 纯化产物加dA | 第45页 |
| 2.6 PCR产物连接T载体和转化 | 第45-46页 |
| 2.7 重建质粒的鉴定和制备 | 第46页 |
| 2.8 CDV H全基因遗传变异分析 | 第46页 |
| 3 试验结果 | 第46-55页 |
| 3.1 H基因的PCR扩增 | 第46-47页 |
| 3.2 重组质粒的鉴定 | 第47-49页 |
| 3.3 H基因的同源性分析 | 第49-51页 |
| 3.4 CDV H基因的遗传进化分析 | 第51-53页 |
| 3.5 H基因推导的氨基酸序列分析 | 第53-55页 |
| 4 讨论 | 第55-59页 |
| 4.1 基于H基因的CDV流行情况 | 第55-57页 |
| 4.2 CDV H基因的变异分析 | 第57-59页 |
| 结论 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-69页 |
| 致谢 | 第69-70页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第70页 |
