| 目录 | 第4-8页 |
| Content | 第8-12页 |
| 縮写词汇 | 第12-14页 |
| 摘要 | 第14-15页 |
| Abstract | 第15-16页 |
| 一、前言 | 第17-35页 |
| 1 裂殖酵母中的细胞周期及其检验点 | 第17-18页 |
| 1.1 裂殖酵母中的细胞周期 | 第17页 |
| 1.2 裂殖酵母中的细胞周期检验点 | 第17-18页 |
| 2 裂殖酵母中维持基因组稳定性和完整性的机制 | 第18-33页 |
| 2.1 DNA损伤的产生 | 第19-21页 |
| 2.1.1 内源途径产生DNA损伤 | 第19-20页 |
| 2.1.1.1 DNA复制过程 | 第19-20页 |
| 2.1.1.1.1 复制起始点及复制起始点的选择 | 第19页 |
| 2.1.1.1.2 DNA复制起始过程 | 第19-20页 |
| 2.1.1.2 复制叉及其影响复制叉稳定性的因素 | 第20页 |
| 2.1.2 外源途径产生DNA损伤 | 第20-21页 |
| 2.2 检验点蛋白及其分子作用途径 | 第21-25页 |
| 2.2.1 检验点蛋白 | 第21-22页 |
| 2.2.2 检验点蛋白的分子作用途径 | 第22-25页 |
| 2.2.2.1 DNA复制检验点途径 | 第22-23页 |
| 2.2.2.2 DNA损伤检验点途径 | 第23-25页 |
| 2.2.2.3 DNA复制检验点和DNA损伤检验点的相互作用 | 第25页 |
| 2.3 DNA损伤修复机制 | 第25-33页 |
| 2.3.1 细胞周期阻滞的调控 | 第25-26页 |
| 2.3.2 复制叉停滞的修复 | 第26-27页 |
| 2.3.3 DNA损伤修复 | 第27-33页 |
| 2.3.3.1 核苷酸切除修复 | 第27页 |
| 2.3.3.2 DSB的修复 | 第27-33页 |
| 2.3.3.2.1 同源重组修复 | 第28-32页 |
| 2.3.3.2.2 NHEJ修复 | 第32页 |
| 2.3.3.2.3 HR和NHEJ的选择 | 第32-33页 |
| 3 rDNA重复序列 | 第33页 |
| 4 核仁蛋白Dnt1 | 第33-34页 |
| 5 本论文研究的目的及意义 | 第34-35页 |
| 二、材料和方法 | 第35-55页 |
| 1 材料 | 第35-46页 |
| 1.1 大肠杆菌菌株E.coli DH5α | 第35页 |
| 1.2 酵母菌株 | 第35-39页 |
| 1.3 质粒 | 第39页 |
| 1.4 引物 | 第39-40页 |
| 1.5 分子生物学工具酶 | 第40页 |
| 1.6 主要试剂及耗材 | 第40-41页 |
| 1.7 主要仪器及设备 | 第41-42页 |
| 1.8 常用培养基、主要缓冲溶液的配制 | 第42-46页 |
| 1.8.1 常用培养基的配制 | 第42-45页 |
| 1.8.2 主要缓冲溶液的配制 | 第45-46页 |
| 2 方法 | 第46-55页 |
| 2.1 裂殖酵母菌株的构建 | 第46-48页 |
| 2.1.1 酵母杂交 | 第46页 |
| 2.1.2 镜检 | 第46-47页 |
| 2.1.3 酶解 | 第47页 |
| 2.1.4 孢子涂布培养 | 第47页 |
| 2.1.5 解剖法 | 第47页 |
| 2.1.6 筛选目的菌株—影印法 | 第47-48页 |
| 2.2 Drop Test | 第48页 |
| 2.3 裂殖酵母基因组提取—机械破碎法 | 第48页 |
| 2.4 裂殖酵母转化 | 第48-49页 |
| 2.5 质粒DNA的质粒 | 第49-50页 |
| 2.5.1 试剂盒提取质粒DNA | 第49-50页 |
| 2.5.2 手提质粒DNA | 第50页 |
| 2.6 琼脂糖胶回收DNA片段 | 第50-51页 |
| 2.7 PCR产物回收 | 第51页 |
| 2.8 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第51-52页 |
| 2.9 质粒DNA的细菌转化 | 第52页 |
| 2.10 常规PCR | 第52-53页 |
| 2.11 DNA限制性内切酶酶切反应 | 第53页 |
| 2.12 DNA连接 | 第53页 |
| 2.13 酵母细胞DAPI染色 | 第53-54页 |
| 2.14 酵母活细胞Hoechst 33342染色 | 第54-55页 |
| 三、实验结果与分析 | 第55-73页 |
| 1 核仁蛋白Dnt在S期是重要的 | 第55页 |
| 2 Dnt1与DNA复制叉保护复合物之间的遗传学作用 | 第55-57页 |
| 3 Dnt1与DNA复制检验点蛋白之间的遗传学作用 | 第57-59页 |
| 4 Dnt1与DNA损伤检验点蛋白之间的遗传学作用 | 第59-61页 |
| 5 Dnt1与DSB修复的关系 | 第61-66页 |
| 5.1 Dnt1与HR蛋白之间没有遗传相互作用 | 第61-63页 |
| 5.2 Dnt1与NHEJ蛋白之间的遗传学作用 | 第63-64页 |
| 5.3 Dnt1独立于NER,UVDE途径发挥功能 | 第64-66页 |
| 6 Dnt1在rDNA区的功能 | 第66-73页 |
| 6.1 Dnt1与Slx1-Slx4复合物之间没有遗传用 | 第66-67页 |
| 6.2 Dnt1与Reb1之间的关系 | 第67-69页 |
| 6.3 Dnt1的功能不依赖于Sap1 | 第69-71页 |
| 6.4 rDNA沉默 | 第71-73页 |
| 四、讨论 | 第73-77页 |
| 1 Dnt1与复制叉保护复合物之间的遗传学作用 | 第73页 |
| 2 Dnt1与DNA维持检验点的关系 | 第73-74页 |
| 3 Dnt1与HR不在同一条通路 | 第74-75页 |
| 4 Dnt1与rDNA区之间的关系 | 第75-77页 |
| 参考文献 | 第77-86页 |
| 致谢 | 第86页 |
