| 摘要 | 第10-14页 |
| Abstract | 第14-19页 |
| 缩略词表 | 第20-22页 |
| 第一章 研究背景与立题依据 | 第22-50页 |
| 1.1 研究背景 | 第22-47页 |
| 1.1.1 海洋微生物资源 | 第22-30页 |
| 1.1.1.1 北极海洋微生物资源 | 第22-24页 |
| 1.1.1.2 海洋产褐藻酸裂解酶的细菌资源 | 第24-30页 |
| 1.1.2 褐藻酸裂解酶 | 第30-47页 |
| 1.1.2.1 褐藻酸的来源、组成与应用 | 第30-32页 |
| 1.1.2.2 褐藻酸裂解酶的来源、分类与作用机制 | 第32-36页 |
| 1.1.2.3 褐藻酸裂解酶的结构 | 第36-43页 |
| 1.1.2.4 褐藻酸裂解酶的催化机制 | 第43-46页 |
| 1.1.2.5 褐藻酸裂解酶的应用 | 第46-47页 |
| 1.2 立题依据 | 第47-48页 |
| 1.3 研究内容 | 第48-50页 |
| 第二章 北极细菌新种SM1214~T的多相分类研究 | 第50-70页 |
| 2.1 引言 | 第50页 |
| 2.2 材料与方法 | 第50-54页 |
| 2.2.1 实验菌株及质粒 | 第50-51页 |
| 2.2.2 实验药品与试剂盒 | 第51页 |
| 2.2.3 主要仪器设备 | 第51-52页 |
| 2.2.4 数据库,分析软件与保藏中心 | 第52页 |
| 2.2.5 试剂和培养基配制 | 第52-54页 |
| 2.3 实验方法 | 第54-60页 |
| 2.3.1 菌株的纯化与保藏 | 第54页 |
| 2.3.2 表型特征鉴定 | 第54-55页 |
| 2.3.3 生理生化特性分析 | 第55-57页 |
| 2.3.4 脂肪酸组分分析 | 第57页 |
| 2.3.5 分子遗传学特征分析 | 第57-60页 |
| 2.3.5.1 16S rRNA基因序列测定与系统发育树的构建 | 第57-59页 |
| 2.3.5.2 细菌基因组DNA的G+C含量的检测及分析 | 第59-60页 |
| 2.4 实验结果 | 第60-67页 |
| 2.4.1 菌株的保藏 | 第60页 |
| 2.4.2 表型特征 | 第60-61页 |
| 2.4.3 生理生化特征 | 第61-62页 |
| 2.4.4 脂肪酸组分鉴定 | 第62-64页 |
| 2.4.5 分子遗传学特征 | 第64-67页 |
| 2.5 讨论 | 第67-70页 |
| 第三章 海洋细菌PL6家族褐藻酸裂解酶AlyGC的异源表达与性质研究 | 第70-88页 |
| 3.1 引言 | 第70页 |
| 3.2 材料与方法 | 第70-72页 |
| 3.2.1 菌株与载体 | 第70-71页 |
| 3.2.2 主要药品和试剂盒 | 第71页 |
| 3.2.3 主要仪器设备 | 第71-72页 |
| 3.2.4 数据库与分析软件 | 第72页 |
| 3.2.5 培养基配制 | 第72页 |
| 3.3 实验方法 | 第72-78页 |
| 3.3.1 基因克隆与表达载体构建 | 第72-74页 |
| 3.3.2 重组蛋白的异源表达与纯化 | 第74-76页 |
| 3.3.2.1 重组蛋白的异源表达 | 第74-75页 |
| 3.3.2.2 蛋白的纯化 | 第75-76页 |
| 3.3.3 蛋白浓度的测定 | 第76页 |
| 3.3.4 AlyGC重组酶酶学性质研究 | 第76-78页 |
| 3.3.4.1 褐藻酸裂解酶AlyGC的酶活测定 | 第76页 |
| 3.3.4.2 AlyGC的底物特异性 | 第76-77页 |
| 3.3.4.3 降解产物的TLC分析 | 第77页 |
| 3.3.4.4 温度对AlyGC酶活性的影响 | 第77页 |
| 3.3.4.5 pH对AlyGC酶活性的影响 | 第77页 |
| 3.3.4.6 NaCl浓度对AlyGC酶活性的影响 | 第77-78页 |
| 3.3.5 蛋白在溶液中聚集形式的测定 | 第78页 |
| 3.4 结果与分析 | 第78-85页 |
| 3.4.1 序列分析 | 第78-79页 |
| 3.4.2 蛋白的表达与纯化 | 第79-80页 |
| 3.4.3 AlyGC酶学性质分析 | 第80-85页 |
| 3.4.3.1 酶的底物特异性 | 第80-81页 |
| 3.4.3.2 AlyGC对PG的降解产物 | 第81-82页 |
| 3.4.3.3 AlyGC的最适反应温度 | 第82-83页 |
| 3.4.3.4 AlyGC的最适反应pH | 第83-84页 |
| 3.4.3.5 AlyGC的最适反应NaCl浓度 | 第84-85页 |
| 3.4.4 AlyGC在溶液中的聚集形式 | 第85页 |
| 3.5 讨论 | 第85-88页 |
| 第四章 海洋细菌PL6家族褐藻酸裂解酶AlyGC的结构解析及其C端结构域的功能研究 | 第88-108页 |
| 4.1 引言 | 第88-89页 |
| 4.2 材料与方法 | 第89-90页 |
| 4.2.1 菌株与载体 | 第89页 |
| 4.2.2 主要药品和试剂盒 | 第89页 |
| 4.2.3 主要仪器设备 | 第89页 |
| 4.2.4 数据库及分析软件 | 第89-90页 |
| 4.2.5 培养基配制 | 第90页 |
| 4.3 实验方法 | 第90-96页 |
| 4.3.1 基因克隆与表达载体构建 | 第90页 |
| 4.3.2 蛋白的异源表达与纯化 | 第90-91页 |
| 4.3.3 蛋白浓度的测定 | 第91页 |
| 4.3.4 蛋白结晶与数据收集 | 第91-93页 |
| 4.3.5 晶体结构解析与修正 | 第93-94页 |
| 4.3.6 突变体的构建 | 第94-95页 |
| 4.3.7 突变体的表达、纯化与酶活测定 | 第95页 |
| 4.3.8 缺失突变体△CTD在溶液中聚集形式的测定 | 第95页 |
| 4.3.9 AlyGC分子中金属离子的检测 | 第95-96页 |
| 4.3.10 圆二色谱检测 | 第96页 |
| 4.4 结果与分析 | 第96-105页 |
| 4.4.1 AlyGC的结晶和结构分析 | 第96-102页 |
| 4.4.1.1 蛋白的整体结构分析 | 第99-100页 |
| 4.4.1.2 蛋白所含金属离子辅基的确定 | 第100-101页 |
| 4.4.1.3 AlyGC与ChonB的结构比较 | 第101-102页 |
| 4.4.2 C端结构域的功能 | 第102-104页 |
| 4.4.2.1 结构分析与突变体的设计 | 第102页 |
| 4.4.2.2 C端结构域突变体的纯化与酶活力研究 | 第102-103页 |
| 4.4.2.3 突变体对蛋白聚集形式的影响 | 第103-104页 |
| 4.4.3 圆二色谱分析 | 第104-105页 |
| 4.5 讨论 | 第105-108页 |
| 第五章 海洋细菌PL6家族褐藻酸裂解酶AlyGC的催化机制研究 | 第108-126页 |
| 5.1 引言 | 第108-109页 |
| 5.2 材料方法 | 第109-110页 |
| 5.2.1 菌株与载体 | 第109页 |
| 5.2.2 主要药品和试剂盒 | 第109页 |
| 5.2.3 主要仪器设备 | 第109页 |
| 5.2.4 数据库及分析软件 | 第109页 |
| 5.2.5 培养基配制 | 第109-110页 |
| 5.3 实验方法 | 第110-113页 |
| 5.3.1 AlyGC与褐藻酸寡糖的共结晶与数据收集 | 第110页 |
| 5.3.2 晶体结构解析 | 第110页 |
| 5.3.3 AlyGC分子中金属离子的螯和与回补 | 第110-111页 |
| 5.3.4 突变体的构建 | 第111-112页 |
| 5.3.5 突变体的纯化与酶活测定 | 第112页 |
| 5.3.6 圆二色谱分析 | 第112-113页 |
| 5.4 结果与分析 | 第113-124页 |
| 5.4.1 AlyGC的复合物结构 | 第113-116页 |
| 5.4.2 AlyGC分子中金属离子的功能分析 | 第116-119页 |
| 5.4.3 复合物结构的构象变化 | 第119-120页 |
| 5.4.4 NTD中重要氨基酸的作用 | 第120-122页 |
| 5.4.5 褐藻酸裂解酶AlyGC的催化机制 | 第122-124页 |
| 5.5 讨论 | 第124-126页 |
| 全文总结与展望 | 第126-128页 |
| 一、本论文取得的创新性成果 | 第126-127页 |
| 二、本论文的不足与下一步展望 | 第127-128页 |
| 参考文献 | 第128-140页 |
| 在读期间论文发表及专利申请情况 | 第140-142页 |
| 致谢 | 第142-143页 |
| 附件 | 第143-179页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第179页 |
