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外源p204对斑马鱼先天免疫的影响和p204转基因载体的构建

中文摘要第6-8页
ABSTRACT第8-9页
符号说明第10-11页
1. 前言第11-19页
    1.1 p204的生物学作用第11-12页
    1.2 脊椎动物先天免疫简介第12-14页
    1.3 斑马鱼作为模式动物的优势第14页
    1.4 斑马鱼先天免疫相关信号通路第14-16页
    1.5 斑马鱼研究常用技术第16-17页
        1.5.1 斑马鱼转基因技术第16页
        1.5.2 突变体技术第16-17页
        1.5.3 胚胎原位杂交技术第17页
        1.5.4 基因过表达技术第17页
    1.6 Tol2转座子的应用第17页
    1.7 研究思路和意义第17-19页
2. 实验材料与方法第19-48页
    2.1 实验材料试剂与仪器第19-24页
        2.1.1 主要实验试剂第19-23页
        2.1.2 实验动物第23页
        2.1.3 主要实验仪器第23-24页
    2.2 方法第24-48页
        2.2.1 斑马鱼的饲养与繁殖第24-25页
        2.2.2 p204-EGFP质粒的扩增与线性化第25-29页
        2.2.3 显微注射第29-30页
        2.2.4 胚胎发育荧光观察和统计第30页
        2.2.5 免疫相关基因的表达检测第30-42页
        2.2.6 斑马鱼p204转基因载体的构建第42-48页
3. 实验结果第48-58页
    3.1 p204-EGFP和EGFP-N1质粒扩增、线性化和纯化结果第48页
    3.2 荧光观察和荧光率、胚胎致死率的统计第48-50页
    3.3 先天免疫相关基因实时定量检测结果第50-53页
        3.3.1 各时期斑马鱼总RNA提取检测结果第50-51页
        3.3.2 反转cDNA扩增目的条带结果第51页
        3.3.3 实时定量PCR结果第51-53页
    3.4 sting和tbk1基因原位杂交结果第53-54页
        3.4.1 sting和tbk1探针的合成结果第53页
        3.4.2 sting和tbk1原位杂交结果第53-54页
    3.5 p204转基因载体tol2-p204的构建结果第54-58页
        3.5.1 p204基因的扩增第54-55页
        3.5.2 tol2-p204质粒线性化结果第55-56页
        3.5.3 pCS-TP质粒线性化与体外合成mRNA第56-57页
        3.5.4 tol2-p204与TP转座酶共注射后斑马鱼荧光观察第57-58页
4. 讨论第58-63页
    4.1 斑马鱼作为模式生物研究TLR信号通路第58-59页
    4.2 p204注射到斑马鱼胚胎中的表达与稳定性第59-60页
    4.3 p204标记物对p204的影响第60-61页
    4.4 斑马鱼实时定量和和原位杂交注意事项第61-62页
    4.5 斑马鱼用于研究先天免疫信号通路的展望第62-63页
5. 结论第63-64页
参考文献第64-72页
致谢第72-73页
攻读学位期间发表的学术论文第73-74页
附件第74页

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