| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 缩略词表 | 第12-14页 |
| 第一章 前言 | 第14-35页 |
| 1.1 猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)概述 | 第14-23页 |
| 1.1.1 PRRSV的病毒学特征 | 第14-15页 |
| 1.1.2 PRRSV的分子生物学特征 | 第15-19页 |
| 1.1.3 PRRSV的生活周期 | 第19-21页 |
| 1.1.4 PRRSV感染的免疫反应特点 | 第21-23页 |
| 1.2 I型干扰素(IFN-I)概述 | 第23-31页 |
| 1.2.1 模式识别受体及其介导的信号通路 | 第23-27页 |
| 1.2.2 JAK-STAT信号通路 | 第27-28页 |
| 1.2.3 ISGs的抗病毒作用 | 第28-29页 |
| 1.2.4 IFN-I的免疫调节作用 | 第29-31页 |
| 1.3 病毒逃逸I型干扰素的研究进展 | 第31-34页 |
| 1.3.1 病毒逃逸IFN-I介导的免疫反应 | 第31-32页 |
| 1.3.2 PRRSV逃逸IFN-I介导的免疫反应 | 第32-34页 |
| 1.4 本研究的目的和意义 | 第34-35页 |
| 第二章 材料与方法 | 第35-52页 |
| 2.1 实验材料 | 第35-37页 |
| 2.1.1 实验动物,细胞与病毒 | 第35页 |
| 2.1.2 实验试剂 | 第35-37页 |
| 2.2 主要仪器设备 | 第37-38页 |
| 2.3 主要试剂配制 | 第38-40页 |
| 2.3.1 分子克隆相关培养基和缓冲液配制 | 第38页 |
| 2.3.2 Western Blot相关试剂配制 | 第38-40页 |
| 2.3.3 细胞培养相关试剂配制 | 第40页 |
| 2.4 实验方法 | 第40-52页 |
| 2.4.1 细胞的复苏、传代与冻存 | 第40-41页 |
| 2.4.2 PAMs的分离培养 | 第41-42页 |
| 2.4.3 猪外周血单核细胞趋化的巨噬细胞的分离培养 | 第42页 |
| 2.4.4 PRRSV的繁殖及病毒滴度的测定 | 第42-43页 |
| 2.4.5 去内毒素提取质粒 | 第43-44页 |
| 2.4.6 细胞转染 | 第44-45页 |
| 2.4.7 双荧光素酶报告基因检测 | 第45-46页 |
| 2.4.8 实时荧光定量PCR(qPCR) | 第46-48页 |
| 2.4.9 Western Blot | 第48-50页 |
| 2.4.10 激光共聚焦实验 | 第50-51页 |
| 2.4.11 数据的统计学分析 | 第51-52页 |
| 第三章 实验结果与分析 | 第52-77页 |
| 3.1 HP-PRRSV通过NF-κB和IRF3信号通路抑制IFNβ的表达 | 第52-56页 |
| 3.1.1 HP-PRRSV感染能够抑制poly(I：C)诱导的IFN-I反应 | 第52-54页 |
| 3.1.2 HP-PRRSV感染可以阻断NF-κB和IRF3信号通路 | 第54-56页 |
| 3.2 HP-PRRSV nsp4通过切割NEMO抑制IFNβ的表达 | 第56-67页 |
| 3.2.1 筛选对IFNβ的产生有抑制作用的病毒蛋白 | 第56-58页 |
| 3.2.2 PRRSV nsp4可以阻断NF-κB信号通路 | 第58-60页 |
| 3.2.3 nsp4抑制RIG-I,VISA,TRIF和IKKβ诱导的IFNβ的表达 | 第60-61页 |
| 3.2.4 nsp4抑制IFNβ产生的作用依赖于其丝氨酸蛋白酶活性 | 第61-63页 |
| 3.2.5 PRRSV nsp4介导了NEMO的切割 | 第63-65页 |
| 3.2.6 PRRSV nsp4切割了NEMO的E349-S350位点 | 第65-67页 |
| 3.3 HP-PRRSV nsp4通过切割VISA阻断RLRs信号通路 | 第67-77页 |
| 3.3.1 HP-PRRSV nsp4抑制了IRF3信号通路 | 第67-68页 |
| 3.3.2 HP-PRRSV nsp4抑制RLRs信号通路 | 第68-69页 |
| 3.3.3 HP-PRRSV nsp4抑制VISA诱导的IFN-I反应 | 第69-70页 |
| 3.3.4 HP-PRRSV nsp4降低了内源性VISA的蛋白水平 | 第70-72页 |
| 3.3.5 HP-PRRSV nsp4切割VISA,破坏其线粒体定位 | 第72-73页 |
| 3.3.6 传统毒株CH-1a的nsp4对VISA没有作用 | 第73-77页 |
| 第四章 分析与讨论 | 第77-81页 |
| 4.1 HP-PRRSV以及4种病毒蛋白对IFN-I的表达均有抑制作用 | 第77-78页 |
| 4.2 nsp4通过切割NEMO阻断NF-κB信号通路 | 第78-79页 |
| 4.3 nsp4介导VISA的切割,抑制RLRs抗病毒的信号通路 | 第79页 |
| 4.4 PRRSV的不同毒株对IFN-I的抑制作用不同 | 第79-81页 |
| 第五章 结论与展望 | 第81-82页 |
| 参考文献 | 第82-100页 |
| 致谢 | 第100-102页 |
| 个人简介 | 第102-103页 |
