| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 第1章 综述 | 第10-19页 |
| 1.1 HIV的流行概况 | 第10页 |
| 1.2 CCR5 | 第10-12页 |
| 1.3 以CCR5为目标的HIV基因治疗方法概况 | 第12-14页 |
| 1.3.1 小分子阻碍物 | 第13页 |
| 1.3.2 针对CCR5的单克隆抗体 | 第13页 |
| 1.3.3 具有编辑作用的趋化因子 | 第13-14页 |
| 1.3.4 锌指核酸酶（ZFN） | 第14页 |
| 1.4 靶标CCR5基因治疗HIV的临床研究进展 | 第14-17页 |
| 1.5 以+36GFP和+36YFP为载体的ZFN蛋白输送系统 | 第17页 |
| 1.6 选题依据和研究意义 | 第17-18页 |
| 1.7 研究内容及研究展望 | 第18-19页 |
| 第2章 +36GFP-ZFNL融合蛋白的表达、纯化及定量分析 | 第19-37页 |
| 2.1 实验材料 | 第19-21页 |
| 2.1.1 质粒、菌株及试剂盒 | 第19页 |
| 2.1.2 实验试剂 | 第19-20页 |
| 2.1.3 实验设备 | 第20-21页 |
| 2.2 实验方法 | 第21-30页 |
| 2.2.1 主要溶液、缓冲液及培养基的配置 | 第21-23页 |
| 2.2.2 质粒单双酶切 | 第23-24页 |
| 2.2.3 融合蛋白小量诱导表达 | 第24-26页 |
| 2.2.4 小量体积条件下纯化融合蛋白 | 第26-27页 |
| 2.2.5 大量体积条件下纯化融合蛋白 | 第27-29页 |
| 2.2.6 蛋白浓度测定 | 第29-30页 |
| 2.3 实验结果 | 第30-36页 |
| 2.3.1 pET22b/+36GFP-ZFNL质粒酶切验证 | 第30页 |
| 2.3.2 BL21中+36GFP-ZFNL表达条件的优化 | 第30-32页 |
| 2.3.3 BL21中+36GFP-ZFNL纯化方法的摸索 | 第32-34页 |
| 2.3.4 +36GFP-ZFNL融合蛋白透析及浓缩 | 第34-35页 |
| 2.3.5 +36GFP-ZFNL融合蛋白的浓度测定及其定量分析 | 第35-36页 |
| 2.4 讨论 | 第36-37页 |
| 第3章 +36YFP-ZFNR融合蛋白的表达、纯化及定量分析 | 第37-44页 |
| 3.1 实验材料 | 第37页 |
| 3.1.1 质粒、菌株及试剂盒 | 第37页 |
| 3.1.2 实验试剂 | 第37页 |
| 3.1.3 实验设备 | 第37页 |
| 3.2 实验方法 | 第37页 |
| 3.3 实验结果 | 第37-43页 |
| 3.3.1 pET22b/+36YFP-ZFNR质粒酶切验证 | 第37-38页 |
| 3.3.2 BL21中+36YFP-ZFNR融合蛋白表达条件的优化 | 第38-39页 |
| 3.3.3 BL21中+36YFP-ZFNR融合蛋白的纯化 | 第39-42页 |
| 3.3.4 +36YFP-ZFNR融合蛋白的浓度测定及定量分析 | 第42-43页 |
| 3.4 讨论 | 第43-44页 |
| 第4章 构建重组质粒pET22b/CCR5 | 第44-62页 |
| 4.1 实验材料 | 第44-45页 |
| 4.1.1 质粒、菌株及试剂盒 | 第44页 |
| 4.1.2 实验试剂 | 第44-45页 |
| 4.1.3 实验设备 | 第45页 |
| 4.2 实验方法 | 第45-55页 |
| 4.2.1 培养HCC1954细胞并提取其基因组DNA | 第45-46页 |
| 4.2.2 CCR5目的基因片段的制备 | 第46-52页 |
| 4.2.3 pET22b载体的制备 | 第52页 |
| 4.2.4 pET22b/CCR5重组质粒的连接构建 | 第52-53页 |
| 4.2.5 pET22b/CCR5鉴定-菌落PCR | 第53-54页 |
| 4.2.6 pET22b/CCR5鉴定-双酶切 | 第54-55页 |
| 4.2.7 pET22b/CCR5鉴定-测序 | 第55页 |
| 4.3 实验结果 | 第55-60页 |
| 4.3.1 培养HCC1954细胞并提取其基因组DNA | 第55-56页 |
| 4.3.2 PCR扩增目的片段及纯化回收 | 第56-57页 |
| 4.3.3 载体pET22b、PCR产物的双酶切后的纯化回收 | 第57-58页 |
| 4.3.4 阳性重组质粒pET22b/CCR5的构建、筛选及鉴定 | 第58-60页 |
| 4.4 讨论 | 第60-62页 |
| 第5章 +36GFP-ZFNL和+36YFP-ZFNR融合蛋白体外活性检测 | 第62-67页 |
| 5.1 实验材料 | 第62-63页 |
| 5.1.1 蛋白、质粒及试剂 | 第62页 |
| 5.1.2 实验设备 | 第62-63页 |
| 5.2 实验方法 | 第63-64页 |
| 5.2.1 配置reaction buffer缓冲液 | 第63页 |
| 5.2.2 梯度稀释超正电荷ZFN融合蛋白至所需浓度 | 第63-64页 |
| 5.2.3 超正电荷ZFN融合蛋白体外活性检测 | 第64页 |
| 5.3 实验结果 | 第64-65页 |
| 5.3.1 超正电荷ZFN融合蛋白作用于重组质粒pET22b/CCR5 | 第64-65页 |
| 5.3.2 反复冻融对超正电荷ZFN融合蛋白活性的影响 | 第65页 |
| 5.4 讨论 | 第65-67页 |
| 结论 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-71页 |
| 致谢 | 第71页 |
