| 致谢 | 第7-8页 |
| 摘要 | 第8-9页 |
| Abstract | 第9页 |
| 英文缩写符号及中英文对照表 | 第15-17页 |
| 第一章 绪论 | 第17-23页 |
| 1.1 表观遗传学概述 | 第17-18页 |
| 1.2 MET1基因研究进展 | 第18-19页 |
| 1.3 DDB1基因研究进展 | 第19-20页 |
| 1.4 植物遗传转化方法 | 第20-21页 |
| 1.5 本课题的研究目的、内容和意义 | 第21-23页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第23-44页 |
| 2.1 实验材料 | 第23-24页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第23页 |
| 2.1.2 引物序列 | 第23页 |
| 2.1.3 常用试剂 | 第23页 |
| 2.1.4 质粒载体 | 第23页 |
| 2.1.5 菌株 | 第23-24页 |
| 2.2 试剂及培养基配制 | 第24-31页 |
| 2.2.1 分子克隆相关试剂培养基配制 | 第24页 |
| 2.2.2 番茄组织培养相关试剂培养基配制 | 第24-28页 |
| 2.2.3 瞬时表达系统相关试剂的配制 | 第28-29页 |
| 2.2.4 免疫共沉淀相关试剂配制 | 第29-31页 |
| 2.3 仪器设备 | 第31-32页 |
| 2.4 载体构建 | 第32-39页 |
| 2.4.1 番茄叶片总RNA的提取 | 第32-33页 |
| 2.4.2 RT-PCR | 第33页 |
| 2.4.3 引物设计要求 | 第33-35页 |
| 2.4.4 目的基因片段的获得 | 第35页 |
| 2.4.5 PCR产物或酶切产物的胶回收纯化 | 第35-36页 |
| 2.4.6 限制性内切酶反应 | 第36页 |
| 2.4.7 DNA片段与载体的连接 | 第36页 |
| 2.4.8 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第36-37页 |
| 2.4.9 大肠杆菌的转化 | 第37页 |
| 2.4.10 重组子阳快速鉴定 | 第37-38页 |
| 2.4.11 菌落PCR检测 | 第38页 |
| 2.4.12 质粒DNA的提取 | 第38页 |
| 2.4.13 DNA测序及核苷酸序列分析 | 第38页 |
| 2.4.14 农杆菌感受态细胞的制备 | 第38页 |
| 2.4.15 重组质粒冻融法转化农杆菌 | 第38-39页 |
| 2.4.16 阳性克隆的鉴定 | 第39页 |
| 2.5 番茄组织培养方法 | 第39-41页 |
| 2.5.1 番茄种子的清洗与培育 | 第39页 |
| 2.5.2 组织预培养 | 第39-40页 |
| 2.5.3 农杆菌侵染 | 第40页 |
| 2.5.4 抗性培养基筛选 | 第40页 |
| 2.5.5 番茄植株生根 | 第40-41页 |
| 2.5.6 炼苗与移栽 | 第41页 |
| 2.5.7 转基因植株阳性鉴定 | 第41页 |
| 2.6 生化实验方法 | 第41-44页 |
| 2.6.1 农杆菌介导的烟草瞬时表达 | 第41-42页 |
| 2.6.2 亚细胞定位 | 第42页 |
| 2.6.3 蛋白质免疫印迹 | 第42-43页 |
| 2.6.4 免疫共沉淀 | 第43-44页 |
| 第三章 实验结果与分析 | 第44-59页 |
| 3.1 生物信息学分析 | 第44-46页 |
| 3.1.1 番茄SlMET1基因的确定 | 第44页 |
| 3.1.2 番茄SlMET1基因保守结构域分析 | 第44页 |
| 3.1.3 番茄SlMET1蛋白理化性质及结构分析 | 第44-45页 |
| 3.1.4 番茄SlMET1蛋白进化树分析 | 第45-46页 |
| 3.2 SlMET1基因的表达模式 | 第46-47页 |
| 3.3 植物表达载体的构建 | 第47-54页 |
| 3.3.1 SlMET1基因全长的克隆 | 第47-48页 |
| 3.3.2 pBI121::SlMET1载体构建 | 第48-49页 |
| 3.3.3 pART27::SlMET1-GFP载体构建 | 第49-51页 |
| 3.3.4 pBTEX::SlMET1-HA载体构建 | 第51-52页 |
| 3.3.5 农杆菌转化 | 第52-54页 |
| 3.4 番茄的组织培养 | 第54-56页 |
| 3.4.1 愈伤组织的诱导 | 第54页 |
| 3.4.2 愈伤组织的分化 | 第54-55页 |
| 3.4.3 完整植株的生根 | 第55页 |
| 3.4.4 转基因阳性植株 | 第55-56页 |
| 3.5 SlMET1蛋白表达的亚细胞定位 | 第56-57页 |
| 3.6 SlMET1与番茄DDB1的相互关系 | 第57-59页 |
| 第四章 讨论与展望 | 第59-61页 |
| 4.1 结论与讨论 | 第59页 |
| 4.2 后续的工作展望 | 第59-61页 |
| 参考文献 | 第61-67页 |
| 攻读硕士学位期间的学术活动及成果情况 | 第67页 |
