| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 主要符号表 | 第14-15页 |
| 第1章 绪论 | 第15-23页 |
| 1.1 氨肽酶的概述 | 第15-18页 |
| 1.1.1 氨肽酶的定义和作用机理 | 第15页 |
| 1.1.2 氨肽酶的来源 | 第15-16页 |
| 1.1.3 氨肽酶的分类 | 第16页 |
| 1.1.4 氨肽酶的生理功能及生化特征 | 第16-17页 |
| 1.1.5 氨肽酶的应用 | 第17-18页 |
| 1.1.6 枯草芽孢杆菌氨肽酶的研究 | 第18页 |
| 1.2 巴斯德毕赤酵母表达系统 | 第18-22页 |
| 1.2.1 毕赤酵母表达系统的特点 | 第19页 |
| 1.2.2 毕赤酵母表达载体 | 第19-20页 |
| 1.2.3 外源蛋白的整合方式及整合后的菌体表型 | 第20-21页 |
| 1.2.4 毕赤酵母表达外源基因的优化策略 | 第21-22页 |
| 1.3 本研究的目的与意义 | 第22-23页 |
| 第2章 材料与方法 | 第23-38页 |
| 2.1 材料 | 第23-27页 |
| 2.1.1 菌株 | 第23页 |
| 2.1.2 质粒 | 第23页 |
| 2.1.3 药品试剂 | 第23-24页 |
| 2.1.4 仪器与设备 | 第24页 |
| 2.1.5 培养基 | 第24-25页 |
| 2.1.6 主要溶液的配制方法 | 第25-27页 |
| 2.2 实验方法 | 第27-38页 |
| 2.2.1 目的基因ywaD的克隆 | 第27-29页 |
| 2.2.2 表达载体pHBM905A-ywaD的构建 | 第29-30页 |
| 2.2.3 毕赤酵母GS115感受态的制备及转化 | 第30页 |
| 2.2.4 氨肽酶YwaD的摇瓶诱导表达 | 第30页 |
| 2.2.5 氨肽酶YwaD的摇瓶诱导条件的优化 | 第30-31页 |
| 2.2.6 氨肽酶YwaD的高密度发酵 | 第31页 |
| 2.2.7 SDS-PAGE的分析及蛋白浓度的测定 | 第31-33页 |
| 2.2.8 氨肽酶YwaD的纯化 | 第33页 |
| 2.2.9 糖基化染色分析 | 第33-34页 |
| 2.2.10 氨肽酶酶活的测定方法 | 第34-35页 |
| 2.2.11 氨肽酶酶学性质的研究 | 第35-36页 |
| 2.2.12 统计学软件的应用 | 第36-38页 |
| 第3章 结果与分析 | 第38-54页 |
| 3.1 表达载体的构建及序列分析 | 第38-41页 |
| 3.2 pHBM905A-ywaD毕赤酵母的转化及其重组子的筛选 | 第41-42页 |
| 3.3 氨肽酶YwaD的诱导表达 | 第42-43页 |
| 3.4 氨肽酶YwaD的摇瓶诱导条件的优化 | 第43-44页 |
| 3.5 氨肽酶YwaD的高密度发酵表达 | 第44-45页 |
| 3.6 氨肽酶YwaD的纯化 | 第45-47页 |
| 3.7 氨肽酶YwaD的糖基化检测 | 第47-49页 |
| 3.8 氨肽酶酶学性质的研究 | 第49-52页 |
| 3.8.1 温度对酶活性的影响 | 第49-50页 |
| 3.8.2 pH对酶活性的影响 | 第50页 |
| 3.8.3 化学试剂对酶活力的影响 | 第50-51页 |
| 3.8.4 金属离子对酶活性的影响 | 第51-52页 |
| 3.8.5 氨肽酶YwaD的最适底物 | 第52页 |
| 3.9 枯草芽孢杆菌BSP1与zj016来源的氨肽酶的性质比较 | 第52-54页 |
| 第4章 讨论与展望 | 第54-56页 |
| 4.1 讨论 | 第54-55页 |
| 4.1.1 氨肽酶在酵母GS115中的表达 | 第54页 |
| 4.1.2 氨肽酶的酶学性质 | 第54-55页 |
| 4.1.3 枯草芽孢杆菌BSP1与zj016来源的氨肽酶来源的比较 | 第55页 |
| 4.2 展望 | 第55-56页 |
| 结论 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-62页 |
| 附录 | 第62-63页 |
| 致谢 | 第63页 |
