| 致谢 | 第4-5页 |
| 中文摘要 | 第5-9页 |
| Abstract | 第9-12页 |
| 缩略词表 | 第13-17页 |
| 1 前言 | 第17-19页 |
| 2 实验材料与仪器 | 第19-23页 |
| 2.1 仪器 | 第19页 |
| 2.2 细胞株 | 第19-20页 |
| 2.3 动物 | 第20页 |
| 2.4 药物与主要试剂 | 第20-23页 |
| 2.4.1 药物 | 第20页 |
| 2.4.2 主要试剂 | 第20-21页 |
| 2.4.3 试剂配制方法 | 第21-23页 |
| 3 实验方法 | 第23-31页 |
| 3.1 细胞常规培养 | 第23页 |
| 3.2 原代结肠癌细胞培养 | 第23页 |
| 3.3 Western Blot检测相关蛋白 | 第23-25页 |
| 3.3.1 细胞培养和样本制备 | 第23页 |
| 3.3.2 总蛋白提取 | 第23-24页 |
| 3.3.3 Lowry法蛋白标定 | 第24页 |
| 3.3.4 蛋白质免疫印迹 | 第24-25页 |
| 3.4 免疫沉淀 | 第25页 |
| 3.5 免疫荧光 | 第25-26页 |
| 3.6 质粒转染 | 第26-27页 |
| 3.7 siRNA转染 | 第27页 |
| 3.8 Real-Time PCR | 第27-29页 |
| 3.8.1 总mRNA提取 | 第27-28页 |
| 3.8.2 逆转录合成cDNA | 第28页 |
| 3.8.3 荧光定量PCR | 第28-29页 |
| 3.9 CRISPR/Cas9技术构建HMGB1稳定敲除细胞 | 第29页 |
| 3.9.1. 构建稳定转染Cas9的细胞株 | 第29页 |
| 3.9.2. 构建HMGB1稳定敲除细胞 | 第29页 |
| 3.10 SRB法测定细胞增殖能力 | 第29-30页 |
| 3.11 裸小鼠移植瘤模型考察药物活性 | 第30页 |
| 3.12 数据分析 | 第30-31页 |
| 4 实验结果 | 第31-54页 |
| 4.1 苏尼替尼对p53稳定性的影响 | 第31-34页 |
| 4.1.1 苏尼替尼诱导细胞自噬的发生与p53的下调 | 第31-32页 |
| 4.1.2 苏尼替尼可下调多株细胞内的野生型p53蛋白水平 | 第32-33页 |
| 4.1.3 苏尼替尼不影响p53的转录水平 | 第33页 |
| 4.1.4 苏尼替尼不影响p53的蛋白合成水平 | 第33-34页 |
| 4.2 苏尼替尼促进p53发生自噬-溶酶体依赖的降解 | 第34-37页 |
| 4.2.1 蛋白酶体抑制剂不会影响苏尼替尼对p53的降解 | 第34-35页 |
| 4.2.2 自噬抑制剂阻断了苏尼替尼对p53的降解 | 第35-36页 |
| 4.2.3 自噬关键基因敲除可抑制苏尼替尼对p53的降解效应 | 第36-37页 |
| 4.3 苏尼替尼促进p53与自噬受体蛋白p62的相互作用 | 第37-40页 |
| 4.3.1 p62参与调控苏尼替尼介导的p53的降解 | 第38页 |
| 4.3.2 苏尼替尼可促进p53的聚集以及与p62的共定位 | 第38-39页 |
| 4.3.3 苏尼替尼可促进p53与p62的相互作用 | 第39-40页 |
| 4.4 苏尼替尼促进p53发生本身核输出信号不依赖的核输出与降解 | 第40-42页 |
| 4.4.1 苏尼替尼促进p53发生核输出 | 第40页 |
| 4.4.2 苏尼替尼介导的p53核输出与降解不依赖其核输出信号 | 第40-42页 |
| 4.5 苏尼替尼介导的p53的核输出与降解依赖于HMGB1的核输出 | 第42-47页 |
| 4.5.1 苏尼替尼促进HMGB1发生核输出 | 第43页 |
| 4.5.2 苏尼替尼增强了HMGB1与p53的相互作用 | 第43-44页 |
| 4.5.3 HMGB1敲除可阻断苏尼替尼诱导的p53的降解 | 第44-45页 |
| 4.5.4 过表达HMGB1可加强苏尼替尼诱导的p53的降解 | 第45页 |
| 4.5.5 HMGB1参与调控苏尼替尼诱导的p53的核输出 | 第45-46页 |
| 4.5.6 苏尼替尼介导的p53的降解依赖于HMGB1的核输出信号 | 第46-47页 |
| 4.6 HMGB1可作为增强苏尼替尼的抗肿瘤活性的关键靶点 | 第47-51页 |
| 4.6.1 自噬抑制剂CQ可提高苏尼替尼的体外抗肿瘤活性 | 第47-48页 |
| 4.6.2 阻断HMGB1可提高苏尼替尼对肿瘤细胞的增殖抑制作用 | 第48-49页 |
| 4.6.3 阻断HMGB1可提高苏尼替尼的体内抗肿瘤活性 | 第49-50页 |
| 4.6.4 阻断HMGB1可恢复p53的蛋白水平及其促凋亡作用 | 第50-51页 |
| 4.7 HMGB1可作为阻断苏尼替尼诱导的肿瘤转移的关键靶点 | 第51-54页 |
| 4.7.1 苏尼替尼促进肿瘤转移标志的出现 | 第51-52页 |
| 4.7.2 阻断HMGB1可抑制苏尼替尼引起的肿瘤转移标志物的出现 | 第52-54页 |
| 5 讨论 | 第54-57页 |
| 参考文献 | 第57-62页 |
| 综述 | 第62-74页 |
| 参考文献 | 第69-74页 |
| 作者简介及在读期间取得的科研成果 | 第74-75页 |
