| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第一章 综述 | 第11-20页 |
| 1.1 关于胆固醇的介绍 | 第11-14页 |
| 1.1.1 胆固醇的分布 | 第11-12页 |
| 1.1.2 胆固醇的合成与代谢 | 第12-13页 |
| 1.1.3 血液胆固醇超标对人体的危害 | 第13页 |
| 1.1.4 调节人体血清胆固醇含量的对策 | 第13-14页 |
| 1.2 胆固醇氧化酶的研究 | 第14-18页 |
| 1.2.1 胆固醇氧化酶的微生物来源 | 第14-15页 |
| 1.2.2 胆固醇氧化酶的基本特性 | 第15-16页 |
| 1.2.3 胆固醇氧化酶的结构 | 第16-17页 |
| 1.2.4 胆固醇氧化酶的作用 | 第17页 |
| 1.2.5 胆固醇氧化酶的测定方法 | 第17页 |
| 1.2.6 胆固醇氧化酶的提取 | 第17-18页 |
| 1.2.7 胆固醇氧化酶的纯化 | 第18页 |
| 1.2.7.1 离子交换层析 | 第18页 |
| 1.2.7.2 凝胶过滤层析 | 第18页 |
| 1.2.7.3 超滤技术 | 第18页 |
| 1.2.7.4 亲和层析 | 第18页 |
| 1.3 研究目的与意义 | 第18-20页 |
| 第二章 材料与方法 | 第20-35页 |
| 2.1 实验材料 | 第20-24页 |
| 2.1.1 样品来源 | 第20页 |
| 2.1.2 主要仪器设备 | 第20-21页 |
| 2.1.3 主要药品 | 第21页 |
| 2.1.4 培养基 | 第21-23页 |
| 2.1.4.1 生理生化培养基 | 第21-22页 |
| 2.1.4.2 其它培养基 | 第22-23页 |
| 2.1.5 主要试剂配制 | 第23-24页 |
| 2.1.5.1 酶活测定所需的试剂 | 第23页 |
| 2.1.5.2 其它试剂的配制 | 第23页 |
| 2.1.5.3 电泳缓冲液的配制 | 第23-24页 |
| 2.2 实验方法 | 第24-28页 |
| 2.2.1 高产胆固醇氧化酶菌种的筛选 | 第24-25页 |
| 2.2.1.1 初筛 | 第24页 |
| 2.2.1.2 复筛 | 第24页 |
| 2.2.1.3 过氧化氢比色法测定酶活 | 第24-25页 |
| 2.2.2 高产胆固醇氧化酶菌株的选择 | 第25-26页 |
| 2.2.3 高产胆固醇氧化酶菌株的鉴定 | 第26-28页 |
| 2.2.3.1 形态学观察 | 第26页 |
| 2.2.3.2 生理生化检测 | 第26-27页 |
| 2.2.3.3 分子生物学鉴定 | 第27-28页 |
| 2.3 胆固醇氧化酶产酶条件的优化 | 第28-31页 |
| 2.3.1 培养基的优化 | 第28-29页 |
| 2.3.1.1 碳源的优化 | 第28页 |
| 2.3.1.2 氮源的优化 | 第28页 |
| 2.3.1.3 胆固醇添加量的选择 | 第28-29页 |
| 2.3.1.4 Triton X-100添加量的选择 | 第29页 |
| 2.3.2 正交试验 | 第29-30页 |
| 2.3.3 数据统计与处理 | 第30页 |
| 2.3.4 培养条件的优化 | 第30-31页 |
| 2.3.4.1 pH对胆固醇氧化酶酶活力的影响 | 第30页 |
| 2.3.4.2 装液量对胆固醇氧化酶酶活力的影响 | 第30-31页 |
| 2.3.4.3 培养温度对产酶的影响 | 第31页 |
| 2.3.4.4 接种量对产酶的影响 | 第31页 |
| 2.4 胆固醇氧化酶的分离纯化及性质研究 | 第31-35页 |
| 2.4.1 蛋白质含量的测定 | 第31-32页 |
| 2.4.1.1 蛋白质标准曲线的制作 | 第31页 |
| 2.4.1.2 蛋白质浓度的测定 | 第31-32页 |
| 2.4.2 胆固醇氧化酶粗酶液的制备 | 第32-33页 |
| 2.4.2.1 硫酸铵饱和度的选择 | 第32-33页 |
| 2.4.2.2 盐析 | 第33页 |
| 2.4.2.3 透析脱盐 | 第33页 |
| 2.4.3 DEAE-cellulose 52阴离子交换层析 | 第33页 |
| 2.4.4 Sephadex G-75凝胶层析 | 第33页 |
| 2.4.5 胆固醇氧化酶的性质研究 | 第33-35页 |
| 2.4.5.1 胆固醇氧化酶最适温度研究 | 第33-34页 |
| 2.4.5.2 胆固醇氧化酶温度稳定性研究 | 第34页 |
| 2.4.5.3 胆固醇氧化酶最适pH研究 | 第34页 |
| 2.4.5.4 胆固醇氧化酶pH稳定性研究 | 第34-35页 |
| 第三章 实验结果 | 第35-56页 |
| 3.1 高产胆固醇氧化酶菌株的筛选 | 第35-37页 |
| 3.1.1 菌株初筛结果 | 第35页 |
| 3.1.2 菌株的复筛结果 | 第35-37页 |
| 3.2 高产胆固醇氧化酶菌株的鉴定 | 第37-41页 |
| 3.2.1 菌落及细胞形态学观察 | 第37-39页 |
| 3.2.1.1 P3菌株的菌落及细胞形态 | 第37页 |
| 3.2.1.2 ZT5白突菌株的菌落及细胞形态 | 第37页 |
| 3.2.1.3 T5菌株的菌落及细胞形态 | 第37-38页 |
| 3.2.1.4 TA3菌株的菌落及细胞形态 | 第38-39页 |
| 3.2.1.5 CT5菌株的菌落及细胞形态 | 第39页 |
| 3.2.2 生理生化试验结果 | 第39-40页 |
| 3.2.3 分子生物学鉴定 | 第40-41页 |
| 3.2.3.1 基因组DNA的提取 | 第40页 |
| 3.2.3.2 基因组DNA纯度的测定 | 第40页 |
| 3.2.3.3 琼脂糖凝胶电泳 | 第40-41页 |
| 3.2.3.4 16S rDNA基因测序 | 第41页 |
| 3.3 Pseudomonas stutzeri产酶条件的优化 | 第41-50页 |
| 3.3.1 培养基的优化 | 第41-48页 |
| 3.3.1.1 不同培养基对Pseudomonas stutzeri产酶能力的影响 | 第41-43页 |
| 3.3.1.2 不同碳源对Pseudomonas stutzeri产酶能力的影响 | 第43页 |
| 3.3.1.3 葡萄糖添加量对Pseudomonas stutzeri产酶能力的影响 | 第43页 |
| 3.3.1.4 不同氮源对Pseudomonas stutzeri产酶能力的影响 | 第43-45页 |
| 3.3.1.5 酵母膏添加量对Pseudomonas stutzeri产酶能力的影响 | 第45页 |
| 3.3.1.6 胆固醇添加量对Pseudomonas stutzeri产酶能力的影响 | 第45-46页 |
| 3.3.1.7 Triton X-100添加量对Pseudomonas stutzeri产酶能力的影响 | 第46页 |
| 3.3.1.8 正交试验 | 第46-47页 |
| 3.3.1.9 验证试验 | 第47-48页 |
| 3.3.2 Pseudomonas stutzeri产胆固醇氧化酶培养条件的优化 | 第48-50页 |
| 3.3.2.1 pH值对Pseudomonas stutzeri产酶能力的影响 | 第48页 |
| 3.3.2.2 培养温度对Pseudomonas stutzeri产酶能力的影响 | 第48页 |
| 3.3.2.3 装液量对Pseudomonas stutzeri产酶能力的影响 | 第48-50页 |
| 3.3.2.4 接种量对Pseudomonas stutzeri产酶能力的影响 | 第50页 |
| 3.4 胆固醇氧化酶的分离纯化及性质研究 | 第50-56页 |
| 3.4.1 胆固醇氧化酶粗酶液的制备 | 第50-51页 |
| 3.4.2 DEAE-cellulose 52阴离子交换层析 | 第51页 |
| 3.4.3 Sephadex G-75凝胶层析 | 第51-53页 |
| 3.4.4 胆固醇氧化酶的性质研究 | 第53-56页 |
| 3.4.4.1 胆固醇氧化酶最适温度研究 | 第53-54页 |
| 3.4.4.2 胆固醇氧化酶热稳定性的研究 | 第54页 |
| 3.4.4.3 胆固醇氧化酶最适pH研究 | 第54-55页 |
| 3.4.4.4 胆固醇氧化酶pH稳定性研究 | 第55-56页 |
| 第四章 结论 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-60页 |
| 致谢 | 第60页 |
