摘要 | 第7-9页 |
ABSTRACT | 第9-10页 |
缩略语表 | 第11-12页 |
1.前言 | 第12-21页 |
1.1 研究课题的由来 | 第12页 |
1.2 文献综述 | 第12-20页 |
1.2.1 植物免疫 | 第12页 |
1.2.2 细胞自噬与植物免疫 | 第12-13页 |
1.2.3 活性氧在植物抗性中的作用 | 第13-15页 |
1.2.4 MAPK级联反应在植物体抗病过程中的作用 | 第15-18页 |
1.2.5 铜胺氧化酶概述 | 第18-19页 |
1.2.6 腺苷酸激酶概述 | 第19-20页 |
1.3 研究目的与意义 | 第20-21页 |
2.材料与方法 | 第21-29页 |
2.1 植物材料 | 第21页 |
2.2 菌株及载体 | 第21页 |
2.3 实验用工具酶、试剂盒及试剂 | 第21-22页 |
2.4 转基因材料的抗性鉴定 | 第22-23页 |
2.4.1 灰霉菌的保存与孢子制备 | 第22页 |
2.4.2 转基因植株的抗性鉴定 | 第22页 |
2.4.3 病斑面积统计 | 第22-23页 |
2.5 候选基因的功能鉴定 | 第23-29页 |
2.5.1 GWAS候选基因对灰霉菌抗性的重复鉴定 | 第23页 |
2.5.2 干涉载体的构建 | 第23-24页 |
2.5.3 干涉载体的遗传转化 | 第24页 |
2.5.4 T0代干涉植株阳性检测 | 第24页 |
2.5.5 T0代转基因植株表达量检测 | 第24-25页 |
2.5.6 SNP位点的鉴定 | 第25-26页 |
2.5.7 灰霉菌诱导表达谱 | 第26页 |
2.5.8 基因在激素突变体中的表达量检测 | 第26页 |
2.5.9 抗性途径标记基因的表达量检测 | 第26页 |
2.5.10 GW9钓饵载体的构建 | 第26-27页 |
2.5.11 单克隆测序对比分析互作候选基因 | 第27-28页 |
2.5.12 酵母双杂点对点互作验证 | 第28页 |
2.5.13 过氧化氢原位检测(DAB染色) | 第28-29页 |
3 结果与分析 | 第29-39页 |
3.1 GWAS候选基因的载体构建以及转基因材料的获得 | 第29页 |
3.2 GWAS候选基因的抗性鉴定 | 第29-31页 |
3.2.1 GW9转基因植株抗性鉴定及结果分析 | 第29-30页 |
3.2.2 GW13转基因植株的抗性鉴定及结果分析 | 第30-31页 |
3.3 转基因T0代植株表达量检测 | 第31-32页 |
3.4 基因的功能鉴定 | 第32-39页 |
3.4.1 GW9及GW13基因的结构分析 | 第32-34页 |
3.4.2 灰霉菌诱导表达谱 | 第34页 |
3.4.3 基因在激素突变体中的表达量检测 | 第34-35页 |
3.4.4 GW9、GW13转基因材料中抗性标记基因的表达量分析 | 第35-36页 |
3.4.5 SNP位点的鉴定 | 第36-38页 |
3.4.6 GW9酵母双杂结果分析 | 第38-39页 |
3.4.7 活性氧的检测 | 第39页 |
4.讨论 | 第39-43页 |
4.1 GW9功能鉴定结果与讨论 | 第40-41页 |
4.2 GW13功能鉴定结果与讨论 | 第41页 |
4.3 实验后续工作预想 | 第41-43页 |
4.3.1 关于GW9后续工作的设想 | 第41-42页 |
4.3.2 关于GW13后续工作的设想 | 第42-43页 |
参考文献 | 第43-48页 |
附录 | 第48-50页 |
致谢 | 第50页 |