| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 第一章 绪论 | 第10-32页 |
| 1.1 生物的分类与古菌 | 第10-13页 |
| 1.1.1 生物的分类与古菌的进化 | 第10-11页 |
| 1.1.2 古菌概述 | 第11-12页 |
| 1.1.3 硫化叶菌介绍 | 第12-13页 |
| 1.2 DNA双链断裂修复 | 第13-22页 |
| 1.2.1 DNA双链断裂及其修复方式 | 第13-16页 |
| 1.2.2 真核生物及细菌的同源重组修复途径 | 第16-20页 |
| 1.2.3 古菌的同源重组修复 | 第20-22页 |
| 1.3 古菌同源重组修复蛋白操纵子herA-mre11-rad50-nurA及其蛋白复合体 | 第22-27页 |
| 1.3.1 古菌同源重组修复蛋白操纵子herA-mre11-rad50-nurA | 第22-23页 |
| 1.3.2 Mre11-Rad50复合物 | 第23-25页 |
| 1.3.3 HerA及NurA蛋白 | 第25-27页 |
| 1.4 蛋白质结构的研究方法:X-射线晶体衍射分析 | 第27-28页 |
| 1.5 利用Red/ET重组技术构建大片段克隆表达载体 | 第28-29页 |
| 1.6 本论文开展的思路 | 第29-32页 |
| 第二章 超嗜热古菌操纵子herA-mre11-rad50-nurA的共表达与蛋白复合体的纯化与性质研究 | 第32-46页 |
| 2.1 材料与方法 | 第32-34页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第32页 |
| 2.1.2 试剂及主要仪器设备 | 第32页 |
| 2.1.3 培养基及主要试剂配方 | 第32-33页 |
| 2.1.4 大肠杆菌GB05dir及BL21-CondonPlus(DE3)-RIL感受态细胞的制备 | 第33页 |
| 2.1.5 利用Red/ET重组技术构建pET30 a-mrhn表达载体 | 第33-34页 |
| 2.1.6 HerA-Mre11-Rad50-NurA的共表达的方法 | 第34页 |
| 2.2 结果与分析 | 第34-44页 |
| 2.2.1 pET30a-mrhn表达载体的构建 | 第34-36页 |
| 2.2.2 HerA-Mre11-Rad50-NurA蛋白在大肠杆菌中的表达、纯化 | 第36-43页 |
| 2.2.3 herA-mre11-rad50-nurA蛋白在冰岛硫化叶菌中的表达与蛋白纯化 | 第43-44页 |
| 2.3 本章小结 | 第44-46页 |
| 第三章 SisHerA蛋白及其突变体的表达、纯化和结晶 | 第46-72页 |
| 3.1 材料与方法 | 第46-49页 |
| 3.1.1 菌株与质粒 | 第46页 |
| 3.1.2 试剂及主要仪器设备 | 第46页 |
| 3.1.3 培养基及主要试剂配方 | 第46页 |
| 3.1.4 大肠杆菌BL21-CondonPlus(DE3)-RIL感受态细胞的制备 | 第46-47页 |
| 3.1.5 大肠杆菌质粒的转化及筛选 | 第47页 |
| 3.1.6 SisHerA蛋白在大肠杆菌中的表达纯化方法 | 第47-48页 |
| 3.1.7 SisHerA蛋白在古菌中的表达纯化方法 | 第48页 |
| 3.1.8 晶体初筛 | 第48-49页 |
| 3.1.9 晶体优化 | 第49页 |
| 3.2 结果与分析 | 第49-70页 |
| 3.2.1 SisHerA C·his蛋白在冰岛硫化叶菌中的表达、纯化与结晶 | 第49-55页 |
| 3.2.2 SisHerA蛋白在大肠杆菌中的表达、纯化与结晶 | 第55-59页 |
| 3.2.3 SisHerA (1-479) N·his蛋白在大肠杆菌中的表达、纯化与结晶 | 第59-62页 |
| 3.2.4 SisHerA-△HAS蛋白在大肠杆菌中的表达、纯化与结晶 | 第62-66页 |
| 3.2.5 SisHerA K154R C·his蛋白在大肠杆菌中的表达、纯化与结晶 | 第66-68页 |
| 3.2.6 SisHerA E356Q C·his蛋白在大肠杆菌中的表达、纯化与结晶 | 第68-70页 |
| 3.3 本章小结 | 第70-72页 |
| 第四章 StoHerA与StoMre11相互作用的验证 | 第72-92页 |
| 4.1 材料与方法 | 第72-73页 |
| 4.1.1 菌株与质粒 | 第72页 |
| 4.1.2 试剂及主要仪器设备 | 第72页 |
| 4.1.3 培养基及主要试剂配方 | 第72页 |
| 4.1.4 表达载体的构建 | 第72-73页 |
| 4.1.5 大肠杆菌DH5α及BL21-CondonPlus(DE3)-RIL感受态细胞的制备 | 第73页 |
| 4.1.6 蛋白的表达与纯化方法 | 第73页 |
| 4.1.7 冰岛硫化叶菌S.islandicus E233S电转化pSeSD-Mre11方法 | 第73页 |
| 4.2 结果与分析 | 第73-90页 |
| 4.2.1 StoHerA及其突变体在大肠杆菌的表达与纯化 | 第73-78页 |
| 4.2.1.1 StoHerA 1-495 no·his的表达与纯化 | 第73-75页 |
| 4.2.1.2 StoHerA 1-478 N·his的表达与纯化 | 第75-76页 |
| 4.2.1.3 StoHerA 342-495 N·his的表达与纯化 | 第76-77页 |
| 4.2.1.4 HerA 286-478 N·his的表达与纯化 | 第77-78页 |
| 4.2.2 StoMre11 no·his及其突变体的表达与纯化 | 第78-81页 |
| 4.2.2.1 StoMre11 no·his在E.coli中的表达与纯化 | 第78-80页 |
| 4.2.2.2 StoMre11 246-387 N·his的表达与纯化 | 第80-81页 |
| 4.2.3 StoMre 1 no.his在冰岛硫化叶菌中的表达与纯化 | 第81-84页 |
| 4.2.4 SisMre11、NurA、Rad50的表达纯化及质谱鉴定 | 第84-90页 |
| 4.2.4.1 pSeSD-Rad50载体的构建 | 第84-85页 |
| 4.2.4.2 SisMre11 C·his及NurA C·his的表达纯化及质谱分析 | 第85-90页 |
| 4.3 本章小结 | 第90-92页 |
| 第五章 总结与展望 | 第92-94页 |
| 5.1 总结 | 第92-93页 |
| 5.2 展望 | 第93-94页 |
| 附录 | 第94-102页 |
| 附录一 药品和试剂 | 第94-95页 |
| 附录二 本文所使用的主要仪器 | 第95-96页 |
| 附录三 本文所涉及的培养基及主要溶液配方 | 第96-98页 |
| 附录四 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第98-99页 |
| 附录五 本文所用引物 | 第99-101页 |
| 附录六 本文所用质粒 | 第101-102页 |
| 参考文献 | 第102-108页 |
| 致谢 | 第108-109页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第109页 |
