| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-12页 |
| 缩略语 | 第12-13页 |
| 引言 | 第13-15页 |
| 第一章 综述 | 第15-27页 |
| 1 腺苷酸激酶 | 第15-19页 |
| ·腺苷酸激酶的来源 | 第15页 |
| ·腺苷酸激酶的三维结构 | 第15-16页 |
| ·腺苷酸激酶（AK）结构域运动的研究 | 第16-18页 |
| ·腺苷酸激酶的应用研究 | 第18-19页 |
| 2 极端嗜热菌 | 第19-20页 |
| ·极端嗜热菌基本介绍 | 第19-20页 |
| ·嗜热菌的分类 | 第20页 |
| 3 嗜热酶研究进展 | 第20-26页 |
| ·嗜热酶的耐热机制 | 第21-23页 |
| ·嗜热酶蛋白质的一级结构特点 | 第21-22页 |
| ·嗜热酶蛋白质的天然构象与耐热性 | 第22页 |
| ·利于嗜热酶稳定性的环境因素 | 第22-23页 |
| ·提高嗜热酶耐热性的方法 | 第23-26页 |
| ·酶的固定化 | 第23页 |
| ·基因工程和蛋白质工程 | 第23-25页 |
| ·化学修饰 | 第25-26页 |
| 4 展望 | 第26-27页 |
| 第二章 实验方案设计 | 第27-28页 |
| 1 研究目的与意义 | 第27页 |
| 2 研究内容 | 第27-28页 |
| 第三章 生物信息学分析 | 第28-32页 |
| 1 序列与工具 | 第28页 |
| ·序列 | 第28页 |
| ·工具 | 第28页 |
| 2 方法 | 第28页 |
| 3 结果 | 第28-30页 |
| ·H827AK 的基因序列及编码的氨基酸序列 | 第28-29页 |
| ·蛋白序列比对 | 第29-30页 |
| 4 讨论 | 第30-32页 |
| 第四章 嗜热腺苷酸激酶基因的克隆 | 第32-43页 |
| 1 材料与试剂 | 第32-35页 |
| ·材料与设备 | 第32页 |
| ·主要工具酶和试剂 | 第32-35页 |
| 2 方法 | 第35-40页 |
| ·重组表达质粒构建的策略 | 第35页 |
| ·重组表达质粒的构建 | 第35页 |
| ·质粒提取 | 第35-36页 |
| ·嗜热腺苷酸激酶基因的PCR 扩增 | 第36-37页 |
| ·ak 基因的PCR 扩增产物的回收 | 第37-38页 |
| ·PCR 产物与pET-28a 载体的双酶切 | 第38-39页 |
| ·连接反应 | 第39页 |
| ·感受大肠杆菌BL21（DE3）的制备 | 第39页 |
| ·连接产物的转化 | 第39-40页 |
| ·阳性克隆的筛选鉴定 | 第40页 |
| 3 结果 | 第40-41页 |
| ·PCR 扩增目的片段 | 第40页 |
| ·阳性重组克隆的鉴定 | 第40-41页 |
| ·重组质粒的测序 | 第41页 |
| 4 讨论 | 第41-43页 |
| 第五章 重组腺苷酸激酶的表达与纯化 | 第43-50页 |
| 1 材料与试剂 | 第43-45页 |
| ·材料与设备 | 第43页 |
| ·试剂 | 第43-45页 |
| 2 方法 | 第45-46页 |
| ·重组质粒在大肠杆菌中的诱导表达 | 第45-46页 |
| ·重组腺苷酸激酶的纯化 | 第46页 |
| ·蛋白浓度测定方法 | 第46页 |
| 3 结果 | 第46-49页 |
| ·重组腺苷酸激酶的诱导表达 | 第46-48页 |
| ·重组H827AK 的表达形式. | 第48页 |
| ·重组H827AK 的纯化. | 第48-49页 |
| ·纯化效率 | 第49页 |
| 4 讨论 | 第49-50页 |
| 第六章 重组H827AK 的基本酶学性质的研究 | 第50-62页 |
| 1 材料与试剂 | 第50页 |
| ·材料与设备 | 第50页 |
| ·试剂 | 第50页 |
| 2 方法 | 第50-54页 |
| ·腺苷酸激酶的测活原理 | 第50-51页 |
| ·最适pH | 第51-52页 |
| ·最适温度 | 第52页 |
| ·80℃条件下的反应动力学 | 第52页 |
| ·重组 HB27AK 的热稳定性 | 第52-53页 |
| ·特异性抑制剂 AP5A 对重组 HB27AK 的作用 | 第53页 |
| ·金属离子对重组 HB27AK 的影响 | 第53-54页 |
| ·普通嗜温酶与重组 HB27AK 的耐热比较 | 第54页 |
| 3 结果 | 第54-60页 |
| ·最适pH | 第54-55页 |
| ·最适温度及热稳定性 | 第55-56页 |
| ·重组H827AK 在80℃下的动力学分析 | 第56-57页 |
| ·AP5A 对AK 的酶活抑制研究 | 第57-58页 |
| ·二价金属离子对嗜热AK 活力的影响 | 第58-59页 |
| ·普通的嗜温酶与重组嗜热酶的耐热比较研究 | 第59-60页 |
| ·重组H827AK 的活性测定 | 第60页 |
| 4 讨论 | 第60-62页 |
| 结论 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-67页 |
| 致谢 | 第67页 |