| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-25页 |
| 1.1 海参 | 第11-12页 |
| 1.1.1 海参形态与生物学特性 | 第11页 |
| 1.1.2 海参的营养与功效 | 第11-12页 |
| 1.1.3 海参的分布 | 第12页 |
| 1.2 仿刺参体表微生物的研究状况 | 第12-14页 |
| 1.2.1 海洋动物与体表微生物 | 第12-13页 |
| 1.2.2 仿刺参体表微生物组成的研究 | 第13页 |
| 1.2.3 仿刺参养殖与病害的发生 | 第13-14页 |
| 1.3 常见细菌的鉴定技术 | 第14-17页 |
| 1.3.1 表型鉴定法 | 第14-15页 |
| 1.3.1.1 细菌常规鉴定法 | 第14页 |
| 1.3.1.2 细菌的数值鉴定和自动化鉴定 | 第14-15页 |
| 1.3.1.3 化学分类鉴定法 | 第15页 |
| 1.3.2 分子遗传学鉴定法 | 第15-17页 |
| 1.3.2.1 细菌染色体DNA G+C含量测定 | 第15页 |
| 1.3.2.2 核酸杂交技术 | 第15页 |
| 1.3.2.3 质粒图谱分析法 | 第15-16页 |
| 1.3.2.4 限制性片段长度多态性分析 | 第16页 |
| 1.3.2.5 随机扩增DNA多态性分析 | 第16页 |
| 1.3.2.6 PCR技术 | 第16页 |
| 1.3.2.7 16S rRNA序列分析法 | 第16-17页 |
| 1.4 未培养微生物的研究 | 第17-18页 |
| 1.4.1 未培养微生物 | 第17-18页 |
| 1.4.2 从未培养微生物中获取新基因资源的研究 | 第18页 |
| 1.5 微生物的多样性研究 | 第18-23页 |
| 1.5.1 总DNA的提取和纯化 | 第19-20页 |
| 1.5.1.1 染色体DNA的提取 | 第19页 |
| 1.5.1.2 质粒DNA的提取方法 | 第19页 |
| 1.5.1.3 DNA的纯化 | 第19-20页 |
| 1.5.1.4 DNA的定量测定 | 第20页 |
| 1.5.2 应用序列分析和指纹图谱的方法评价微生物多样性 | 第20-22页 |
| 1.5.2.1 序列分析 | 第20-21页 |
| 1.5.2.2 指纹图谱 | 第21-22页 |
| 1.5.3 采用分子标记进行微生物群落结构分析 | 第22-23页 |
| 1.5.3.1 扩增片段长度多态性 | 第22页 |
| 1.5.3.2 限制性片段长度多态性 | 第22页 |
| 1.5.3.3 基于PCR技术的研究方法 | 第22-23页 |
| 1.5.3.4 采用分子探针来鉴定和分析微生物 | 第23页 |
| 1.6 论文研究内容及意义 | 第23-25页 |
| 第二章 仿刺参体表可培养细菌的分离鉴定 | 第25-43页 |
| 2.1 材料 | 第25-27页 |
| 2.1.1 样品采集 | 第25页 |
| 2.1.2 试剂 | 第25-26页 |
| 2.1.3 培养基及配制方法 | 第26页 |
| 2.1.4 实验仪器 | 第26-27页 |
| 2.2 方法 | 第27-33页 |
| 2.2.1 样品的前处理 | 第27页 |
| 2.2.2 细菌的分离和培养 | 第27页 |
| 2.2.3 细菌的形态观察 | 第27-28页 |
| 2.2.4 细菌的生理生化特性分析 | 第28页 |
| 2.2.5 细菌的分子遗传学鉴定和系统发育分析 | 第28-33页 |
| 2.2.5.1 细菌基因组DNA的制备 | 第28-29页 |
| 2.2.5.2 16S rDNA的PCR扩增 | 第29-31页 |
| 2.2.5.3 测序和系统发育分析 | 第31-32页 |
| 2.2.5.4 酶切 | 第32-33页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第33-41页 |
| 2.3.1 不同培养基主要分离的细菌种类 | 第33页 |
| 2.3.2 不同季节仿刺参体表细菌数量的变化 | 第33-34页 |
| 2.3.3 仿刺参体表细菌的菌体形态 | 第34-35页 |
| 2.3.4 仿刺参体表细菌生理生化特性分析 | 第35-36页 |
| 2.3.5 养殖海水中细菌的鉴定 | 第36-37页 |
| 2.3.6 仿刺参体表可培养细菌的系统发育学分析 | 第37-39页 |
| 2.3.7 仿刺参体表可培养细菌的酶切图谱 | 第39-40页 |
| 2.3.8 仿刺参体表可培养细菌的菌相分析 | 第40-41页 |
| 2.4 小结 | 第41-43页 |
| 第三章 仿刺参体表未培养细菌多样性的初步分析 | 第43-58页 |
| 3.1 材料 | 第43-45页 |
| 3.1.1 样品采集 | 第43页 |
| 3.1.2 菌株和质粒 | 第43页 |
| 3.1.3 主要试剂 | 第43-44页 |
| 3.1.4 工具酶 | 第44页 |
| 3.1.5 引物 | 第44页 |
| 3.1.6 主要仪器 | 第44-45页 |
| 3.2 实验方法 | 第45-51页 |
| 3.2.1 仿刺参体表细菌总DNA的提取 | 第45页 |
| 3.2.2 样品16S rDNA的PCR扩增 | 第45-47页 |
| 3.2.2.1 PCR扩增 | 第45-46页 |
| 3.2.2.2 PCR产物回收纯化 | 第46-47页 |
| 3.2.3 构建16S rDNA克隆 | 第47-48页 |
| 3.2.3.1 CaCl_2法制备大肠杆菌感受态细胞 | 第47页 |
| 3.2.3.2 TA克隆 | 第47-48页 |
| 3.2.3.3 转化 | 第48页 |
| 3.2.4 TA克隆的筛选与验证 | 第48-49页 |
| 3.2.5 重组质粒DNA的提取和扩增 | 第49-50页 |
| 3.2.5.1 重组质粒DNA的提取 | 第49-50页 |
| 3.2.5.2 重组质粒DNA的PCR扩增 | 第50页 |
| 3.2.6 Hae Ⅲ和Hinf Ⅰ双酶切 | 第50-51页 |
| 3.3 结果与分析 | 第51-57页 |
| 3.3.1 不同DNA提取方法的裂解效率及纯化质量评价 | 第51页 |
| 3.3.2 细菌总DNA PCR扩增结果 | 第51-54页 |
| 3.3.2.1 影响PCR结果的因素 | 第51-53页 |
| 3.3.2.2 PCR扩增结果 | 第53-54页 |
| 3.3.3 克隆结果 | 第54-55页 |
| 3.3.3.1 TA克隆效率的影响因素 | 第54页 |
| 3.3.3.2 TA克隆结果 | 第54-55页 |
| 3.3.4 限制性片段长度多态性分析 | 第55-57页 |
| 3.4 小结 | 第57-58页 |
| 总结 | 第58-59页 |
| 问题与展望 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-65页 |
| 致谢 | 第65页 |
