| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 1 文献综述 | 第12-22页 |
| 1.1 猪冷冻精液人工授精现状及存在的问题 | 第12页 |
| 1.2 冷冻过程中的精子损伤 | 第12-14页 |
| 1.2.1 结构与功能损伤 | 第12-13页 |
| 1.2.2 分子损伤 | 第13-14页 |
| 1.3 猪精子冷冻保存添加剂概述 | 第14-16页 |
| 1.3.1 渗透型抗冻剂 | 第14-15页 |
| 1.3.2 糖类 | 第15页 |
| 1.3.3 抗氧化剂 | 第15-16页 |
| 1.4 Caspase家族概述 | 第16-19页 |
| 1.4.1 Caspase的结构、特点及分类 | 第16-17页 |
| 1.4.2 Caspase的激活机制 | 第17-19页 |
| 1.5 冷冻与细胞凋亡 | 第19-20页 |
| 1.6 内参筛选的重要性 | 第20-21页 |
| 1.7 研究内容与目的意义 | 第21-22页 |
| 2. 材料和方法 | 第22-33页 |
| 2.1 试验材料 | 第22-24页 |
| 2.1.1 试验动物 | 第22页 |
| 2.1.2 所用仪器设备 | 第22页 |
| 2.1.3 药品及主要试剂的配制 | 第22-24页 |
| 2.2 试验方法 | 第24-33页 |
| 2.2.1 试验设计 | 第24页 |
| 2.2.2 猪精液冷冻程序 | 第24-25页 |
| 2.2.3 精子Total RNA的提取 | 第25-26页 |
| 2.2.4 精子Toal RNA质检 | 第26页 |
| 2.2.5 cDNA的合成 | 第26-27页 |
| 2.2.6 PCR引物设计 | 第27页 |
| 2.2.7 RT-PCR | 第27-29页 |
| 2.2.8 荧光定量PCR | 第29-30页 |
| 2.2.9 内参基因筛选 | 第30页 |
| 2.2.10 凋亡试剂盒检测精子冷冻-解冻后Caspase-3(-6/9、-8)的表达情况 | 第30-32页 |
| 2.2.11 膜联蛋白V的检测 | 第32页 |
| 2.2.12 数据统计与分析 | 第32-33页 |
| 3 结果与分析 | 第33-51页 |
| 3.1 内参筛选结果 | 第33-37页 |
| 3.1.1 RNA的质量 | 第33页 |
| 3.1.2 候选内参基因的验证,扩增效率和表达水平 | 第33-34页 |
| 3.1.3 候选内参基因的表达稳定性 | 第34-37页 |
| 3.1.4 综合排名顺序 | 第37页 |
| 3.2 猪精子冷冻-解冻后的活率与活力 | 第37-40页 |
| 3.3 冷冻对Caspase表达的影响 | 第40-45页 |
| 3.3.1 冷冻稀释液中抗冻剂3%甘油、DMSO、乙二醇对Caspase基因表达的影响 | 第40-41页 |
| 3.3.2 冷冻稀释液中添加糖类对Caspase基因表达的影响 | 第41-43页 |
| 3.3.3 冷冻稀释液中添加抗氧化剂对Caspase基因表达的影响 | 第43-45页 |
| 3.4 冷冻对Caspases蛋白酶活性水平的影响 | 第45-48页 |
| 3.5 冷冻对膜联蛋白V影响的结果 | 第48-51页 |
| 4 讨论 | 第51-58页 |
| 4.1 内参基因筛选结果 | 第51-52页 |
| 4.2 猪精子冷冻-解冻后精子的活率与活力 | 第52-53页 |
| 4.3 冷冻-解冻后Caspase基因的表达情况 | 第53-56页 |
| 4.4 冷冻-解冻后Caspase蛋白酶活性 | 第56-57页 |
| 4.5 膜联蛋白V-FITC染色 | 第57-58页 |
| 5 结论 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-70页 |
| 致谢 | 第70-71页 |
| 攻读硕士期间发表文章 | 第71页 |
