| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 1 文献综述 | 第9-26页 |
| 1.1 脂肪细胞的特点 | 第9-10页 |
| 1.1.1 前脂肪细胞的生物学特征 | 第9页 |
| 1.1.2 前脂肪细胞的分化 | 第9-10页 |
| 1.1.3 成熟脂肪细胞的特征 | 第10页 |
| 1.2 前脂肪细胞的体外培养与诱导分化 | 第10-11页 |
| 1.2.1 前脂肪细胞的体外培养 | 第10-11页 |
| 1.2.2 前脂肪细胞的诱导分化 | 第11页 |
| 1.3 抑制消减杂交 | 第11-13页 |
| 1.3.1 抑制差减杂交的原理 | 第12页 |
| 1.3.2 抑制差减杂交主要步骤 | 第12-13页 |
| 1.4 IGF1以及IGFBP3、ENO1、DCBLD2、APOE、BCL6基因的功能 | 第13-18页 |
| 1.4.1 IGF1的功能和研究进展 | 第13-14页 |
| 1.4.2 IGFBP3的功能 | 第14-15页 |
| 1.4.3 ENO1的功能 | 第15-16页 |
| 1.4.4 DCBLD2的功能 | 第16页 |
| 1.4.5 APOE的功能 | 第16-17页 |
| 1.4.6 BCL6的功能 | 第17-18页 |
| 1.5 实时荧光定量PCR技术 | 第18-20页 |
| 1.5.1 荧光定量PCR的原理 | 第18-19页 |
| 1.5.2 几种实时荧光定量PCR技术的方法 | 第19-20页 |
| 1.5.3 荧光定量PCR的应用 | 第20页 |
| 1.6 真核表达载体构建 | 第20-22页 |
| 1.6.1 增强型绿色荧光蛋白表达载体pEGFP | 第21页 |
| 1.6.2 真核表达载体pEGFP-N3 | 第21-22页 |
| 1.7 真核细胞转染技术 | 第22-25页 |
| 1.7.1 瞬时和稳定转染 | 第23页 |
| 1.7.2 常见细胞转染方法 | 第23-25页 |
| 1.8 本试验的研究内容和意义 | 第25-26页 |
| 2 材料与方法 | 第26-35页 |
| 2.1 试验材料 | 第26-28页 |
| 2.1.1 试验动物 | 第26页 |
| 2.1.2 主要试验试剂 | 第26-27页 |
| 2.1.3 试验主要仪器 | 第27-28页 |
| 2.2 试验方法 | 第28-35页 |
| 2.2.1 猪前脂肪细胞原代培养 | 第28-29页 |
| 2.2.2 猪前脂肪细胞诱导分化 | 第29页 |
| 2.2.3 目的基因在脂肪细胞分化过程中表达量的检测 | 第29-31页 |
| 2.2.4 猪前脂肪细胞分化过程中的生长曲线的建立 | 第31页 |
| 2.2.5 真核表达重组质粒pEGFP-N3-IGF1的构建 | 第31-33页 |
| 2.2.6 重组质粒pEGFP-N3-IGF1体外转染猪前脂肪细胞 | 第33-34页 |
| 2.2.7 MTS检测pEGFP-N3-IGF1转染组和对照组细胞增殖情况 | 第34-35页 |
| 3 结果与分析 | 第35-49页 |
| 3.1 猪前脂肪细胞原代培养 | 第35-36页 |
| 3.2 猪前脂肪细胞诱导分化 | 第36-37页 |
| 3.3 各基因的实时荧光定量检测结果 | 第37-41页 |
| 3.3.1 各基因的熔解曲线和扩增曲线 | 第37页 |
| 3.3.2 目标基因的相对表达量与分析 | 第37-40页 |
| 3.3.3 目标基因相对表达量的相关性分析 | 第40-41页 |
| 3.4 猪前脂肪细胞诱导分化过程中生长曲线建立结果 | 第41-44页 |
| 3.5 真核表达重组质粒pEGFP-N3-IGF1的构建 | 第44-46页 |
| 3.5.1 提取Total RNA提取结果 | 第44-45页 |
| 3.5.2 目的片段猪IGFI的获取 | 第45页 |
| 3.5.3 pEGFP-N3-IGF1的构建 | 第45-46页 |
| 3.6 重组质粒pEGFP-N3-IGF1体外转染猪前脂肪细胞 | 第46-47页 |
| 3.7 MTS检测对照组和试验组细胞增殖情况 | 第47-49页 |
| 4 讨论 | 第49-53页 |
| 4.1 各基因对脂肪细胞诱导分化过程中增殖能力的影响 | 第49-51页 |
| 4.2 构建真核重组质粒pEGFP-N3-IGF1过程中遇到的问题以及解决方案 | 第51-52页 |
| 4.3 转染载体过程中遇到的问题及解决方案 | 第52-53页 |
| 4.4 IGF1对脂肪细胞诱导分化过程中增殖能力的影响 | 第53页 |
| 5 结论 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-62页 |
| 致谢 | 第62页 |
